义齿基托材料与表面粗糙度对白色念珠菌黏附的影响

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本文通过对不同表面粗糙度的热凝树脂和钴铬合金两种义齿基托材料对白色念珠菌在体外黏附的对比研究,观察其表面对白色念珠菌体外早期黏附的影响,为临床基托材料的选择和表面处理提供理论依据。 研究方法:义齿基托试件制备义齿树脂基托试件的制备,严格按照厂商说明书要求进行固化,每个试件按8mm×5mm×2mm标准制作,共21个,随机分为A1、A2、A3三组,每组7个试件;钴铬合金义齿基托试件,按钴铬合金铸造程序要求制备8mm×5mm×2mm标准试件,共14个,随机分为B1、B2两组,每组7个试件。共五组35个义齿基托试件。 义齿基托试件研磨程序A1组试件仅使用白矾石研磨;A2组试件使用白矾石和320#沙纸研磨;A3组试件使用白矾石、320#沙纸和浮石粉研磨。全部程序由同一人完成,且按同一方向研磨,研磨工具相同,使用条件及工作时间为:马达转速2000转/分,每步处理时间均为15秒。 B1组试件采用喷砂、绿色砂石和棕色金刚砂橡皮轮研磨;B2组试件采用喷砂、绿色砂石、棕色金刚砂橡皮轮、硬橡皮轮和擦有抛光绿的绒轮研磨。全部程序由同一人完成,且按同一方向研磨,研磨工具的使用条件及工作时间相同。研磨后的所有试件用蒸馏水超声清洗,干燥待用。 义齿基托试件表面粗糙度的测量将被测试件置于表面轮廓测量仪(profilometer)的载物台上,调整试件测量面至水平,且测定方向与研磨方向垂直,在其上随机选取5个位置点,取样长度为0.8mm,5个位点的测量总长度为4mm。轮廓仪的传感器触针以1mm/s的速度从测量面上走过,测量其表面粗糙度。取5个位置点的表面粗糙度的平均值作为该试件的平均表面粗糙度(surfaceroughness,Ra)。 将测量后的试件经蒸馏水超声清洗,分别在紫外线下照射试件各面24小时后备用。 白色念珠菌菌悬液的制备选用国际标准菌株ATCC90028,按McFarland比浊法制成含菌浓度为3.0×107/mL的菌悬液。 白色念珠菌对试件的黏附将制备好的试件置于每孔含1.75ml菌悬液的24孔板中,每孔一个试样,在37℃、80转/分钟条件下培养1小时后,吸去菌悬液,用无菌PBS液清洗1分钟并轻轻震荡,然后用无菌生理盐水轻洗,以去除表面未黏附的细菌后备用。 义齿基托试件表面白色念珠菌粘附情况扫描电子显微镜观察 在五组试件中各取一个试件分别用PBS液漂洗去表面的培养液后,戊二醛溶液固定2小时,蒸馏水清洗三次,每次10分钟,而后用乙醇逐级脱水各10分钟,干燥,表面喷金,置扫描电子显微镜(日立3500N电压=10KV)下观察白色念珠菌粘附情况并拍照。 义齿基托试件表面白色念珠菌粘附量检测脱菌、倍比稀释将无菌生理盐水冲洗后的剩余试件分别加入有2ml胰蛋白酶溶液(2.5g/L)的试管中,机械震荡5分钟后,倍比稀释至原来浓度的10-4倍。 培养、计数吸取200μL稀释菌液均匀接种于白色念珠菌培养基上,在37℃恒温箱中,培养72小时后,进行菌落形成单位计数,并进一步根据稀释倍数计算出原菌液形成单位(×104CFU/mL)。 将取得的各组试件平均表面粗糙度及白色念珠菌的黏附量输入计算机,采用SPSS10.0软件处理,进行多样本的细菌黏附量和粗糙度值均数比较的方差分析,并用SNK法检验两组间差异性。 研究结果:义齿基托试件表面粗糙度测量结果经测定五组义齿基托试件的表面粗糙度均值为(Raμm):A1组:2.93±0.24;A2组:1.69±0.14;A3组:0.32±0.02;B1组:1.24±0.06;B2组:0.31±0.03。 义齿基托试件表面白色念珠菌黏附情况电子扫描显微镜观查结果 义齿基托试件表面均有白色念珠菌附着。树脂组试件表面白色念珠菌黏附量显著多于钴铬合金组,并有成链分布及聚集趋势,而且其表面刻痕、沟纹不规则缺陷较多;B2组试件表面白色念珠菌黏附量最少,仅见少量散在分布,其表面浅的刻痕、沟纹也较其它四组试件表面明显减少。 义齿基托试件表面白色念珠菌黏附量检测结果经培养、计数五组义齿基托试件的表面白色念珠菌黏附量的均值为(×104CFU/mL):A1组:6.69±0.23;A2组:5.13±0.68;A3组:2.27±0.31;B1组:4.45±0.99;B2组:1.40±0.17。 统计分析结果各组基托试件表面粗糙度(Ra)均值进行两两比较,除B2组和A3组之间的Ra均值无显著性差异(P>0.05)外,其余各组组间Ra均值均有显著性差异(P<0.05)。 对各组基托试件上白色念珠菌黏附的CFU值进行两两比较,各组组间CFU均值均有显著性差异(P<0.05)。 研究结论: 1.不同材料的义齿基托经过有效的研磨程序,其表面均可达到较佳光洁度。 2.义齿基托表面粗糙度可以影响白色念珠菌在其表面的黏附。同种材料表面粗糙度越大,黏附的白色念珠菌越多。并呈正相关关系。 3.不同材料的义齿基托在表面粗糙度相同时,对白色念珠菌的黏附也不同。钴铬合金基托黏附的白色念珠菌较少,热凝树脂基托较多。
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