实验目的:　　 初步探讨长期培养的CIK细胞hTERT基因表达水平的变化,进一步评价CIK细胞治疗的安全性。　　 实验方法:　　 抽取3名健康人外周静脉血进行CIK细胞培养,每周台盼蓝染色计数细胞,实时荧光定量PCR法检测培养第0、2、7、21及42天的CIK细胞hTERTmRNA基因的表达水平,流式细胞仪分析培养第0、7、14、28、49及56天的CIK细胞周期的改变并检测凋亡,MTT法测定培养第14、30天的CIK细胞对肺腺癌LTPEP-a-2细胞系的细胞毒活性。　　 结果:　　 CIK细胞在体外培养第28天至第35天细胞增殖达高峰,分别由第0天的5.6×106、5.6×106、8.0×106增加至第28天的37.5×106,71×106和第35天的127.6×10°,与第0天相比分别扩增6.70、10.76和15.95倍,此后存活细胞逐渐减少,最终约60天左右细胞全部死亡,与流式细胞仪检测细胞凋亡结果一致;CIK细胞hTERT表达水平在培养48小时最高,hTERT的CT值在第0天分别为30.57、32.27、30.44,培养至第2天的CT值分别为29.91、31.54、27.86,采用△△CT方法进行定量,使用管家基因β-actin来比较hTERT的相对含量,可见CIK细胞hTERT的表达水平较第0天增加约2.84±1.27倍,随后随培养时间延长表达水平下降,在培养1周时降至培养初始水平,并在此后的培养过程中维持低水平表达:在CIK培养1周时处于S期细胞比例最高,约41.27±4.57%,随培养时间延长G0/G1期细胞比例占绝大部分,在培养第49天G0/G1期细胞比例在90%以上(97.56±1.17%);CIK细胞在第14天杀瘤活性约58.58±8.52%,在30天时杀瘤活性明显下降,约32.47±7.51%。　　 结论:　　 长期培养的CIK细胞随培养时间延长hTERT表达水平下降,未见细胞永生化倾向。