[背景及目的]纤维介素蛋白[Fibrinogen-like protein 2 (fgl 2)/fibroleukin]属纤维蛋白原相关蛋白超家族,又称fgl2凝血酶原酶,具有丝氨酸蛋白酶活性,可直接催化凝血酶原转变成有活性的凝血酶,从而快速启动凝血反应。我们前期研究发现,fgl2在多种恶性实体肿瘤有较为广泛的表达,主要分布于肿瘤实质细胞、肿瘤间质浸润细胞和血管内皮细胞,且表达部位与纤维蛋白沉积部位一致。本研究旨在应用人高侵袭性肝癌细胞模型(HCCLM6)和人单核巨噬细胞模型(THP-1)体外实验探讨fgl2凝血酶原酶在人高侵袭性肝癌肿瘤细胞生长,血管生成及肿瘤侵袭中的作用及作用机制,为进一步研究肿瘤靶向治疗提供新的视角。[方法]用RNA干扰技术建立fgl2稳定敲除的人高侵袭性肝癌细胞HCCLM6细胞系和人单核巨噬细胞THP-1细胞系；用RT-PCR方法检测人高侵袭性肝癌细胞(HCCLM6)在静息状态下和白细胞介素1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)作用下fg12 mRNA水平的表达；以流式细胞技术检测fgl2干扰前后HCCLM6细胞体外培养增殖和凋亡水平以及THP-1细胞表面活化抗原表达水平的改变；ELISA和RT-PCR方法分别检测白细胞介素8(IL-8)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、TNF-α和转化生长因子β(TGF-β)蛋白表达和基因转录水平；应用Transwell技术检测THP-1细胞趋化和HCCLM6细胞侵袭；应用流式细胞仪液态芯片(CBA)技术定量检测信号分子p38-MAPK、ERK、JNK、PLC-γ和STAT3的磷酸化水平；应用免疫组织化学染色技术检测裸鼠皮下移植肿瘤组织中fgl2、磷酸化p38-MAPK和ERK的表达。[结果]HCCLM6细胞在炎性细胞因子TNF-α诱导下表fgl2水平显著升高；fgl2干扰后HCCLM6细胞增殖和侵袭能力显著降低,对TNF-α诱导凋亡的抵抗能力下降,且表达VEGF和IL-8水平降低；fgl2干扰降低了HCCLM6细胞在TNF-α刺激下的p38-MAPK、ERK、JNK磷酸化水平；外源性膜结合型fgl2蛋白通过凝血依赖途径激活HCCLM6细胞MAPK信号传导通路；裸鼠皮下移植肿瘤组织中肿瘤实质细fgl2表达与ERK的磷酸化水平成正相关。与未干扰的THP-1细胞相比，fgl2干扰的THP-1细胞表面细胞活化抗原CD38和CDllb的表达水平下降,而抗原递呈相关分子HLA-DR表达水平升高,CD14表达水平无显著差异,细胞趋化能力、表达IL-8和VEGF水平以及促进肿瘤细胞侵袭能力降低；外源性可溶性fgl2蛋白刺激负向调节THP-1细胞JNK通路的活化,膜结合型fgl2蛋白通过凝血依赖途径正向调节THP-1细胞p38-MAPK和JNK信号传导通路的活化。[结论]肿瘤微环境中的炎性因子可诱导肝癌肿瘤细胞和肿瘤浸润单核巨噬细胞高表达fgl2,fgl2的表达可通过直接或间接活化MAPK信号通路促进肝癌肿瘤生长、侵袭和血管新生,并增强肝癌细胞对TNF-α诱导凋亡的耐受。[目的]探讨人凝血酶原酶[human fibrinogen2 like protein 2(hfgl2)/fibroleukin]在人高侵袭性肝癌细胞(HCCLM6)中的表达及在肝癌肿瘤细胞生长和血管生成中的作用。[方法]用RT-PCR方法检测人HCCLM6细胞在静息和细胞因子作用下fgl2的mRNA表达水平；用RNA干扰技术建立fgl2稳定敲除的HCCLM6细胞系；以流式细胞技术检测fgl2干扰后的HCCLM6细胞体外培养细胞周期和增殖指数的改变以及对TNF-a诱导凋亡的抵抗能力改变；ELISA和适时荧光定量RT-PCR方法检测促血管生成细胞因子IL-8和VEGF蛋白和mRNA水平的改变；应用matrigel胶包被的Transwell检测fgl2敲除后的HCCLM6细胞侵袭能力改变。[结果]IFN-γ、IL-1β和TNF-α均可在mRNA水平上调HCCLM6细胞fgl2的表达,在TNF-α＜100ng/ml浓度范围内,其刺激浓度的增加与fgl2的表达水平成正相关；fgl2干扰后HCCLM6细胞增殖指数显著降低,细胞周期分析S期比例显著下降,对TNF-a诱导凋亡的抵抗能力减弱,侵袭能力显著降低；与对照组未干扰的HCCLM6细胞相比，fgl2敲除的HCCLM6细胞体外培养静息状态下IL-8和VEGF表达无显著差异,但TNF-a诱导下的IL-8和VEGF mRNA和蛋白表达水平均显著降低。[结论]HCCLM6细胞在炎性细胞因子TNF-a等作用下上调fgl2表达,fgl2蛋白的表达可直接促进HCCLM6细胞的生长、侵袭和促血管生成因子的表达,并增强HCCLM6细胞对TNF-a诱导凋亡的耐受。[目的]探讨fgl2在肿瘤浸润单核巨噬细胞中的表达对肿瘤侵袭和血管新生的影响。[方法]应用RNA干扰技术建立fgl2稳定敲除的人单核巨噬细胞系THP-1细胞；RT-PCR和流式细胞技术检测干扰效果；Transwell检测fgl2干扰对单核巨噬细胞趋化功能的影响；分别将fgl2干扰或未干扰的THP-1细胞与人高侵袭性肝癌HCCLM6细胞共培养,流式细胞技术检测THP-1细胞表面抗原表达水平改变,ELISA法检测细胞共培养上清液中细胞因子IL-8、VEGF、TNF-α、TGF-β浓度水平的差别；应用Matrigel包被的Transwell检测fgl2干扰的单核巨噬细胞与HCCLM6共培养对肿瘤细胞侵袭能力的影响。[结果]建立了fgl2稳定敲除的THP-1细胞系；与未干扰的THP-1细胞相比，fgl2干扰后的THP-1细胞趋化能力显著减弱；表达细胞活化抗原CD11b、CD38水平降低,HLA-DR表达水平增高,CD14表达水平无显著差别；与HCCLM6细胞共培养分泌IL-8、VEGF水平降低,TNF-α、TGF-β水平无显著差别；与fgl2(-)THP-1细胞接触培养的HCCLM6细胞侵袭能力显著低于与THP-1接触培养的HCCLM6细胞。[结论]单核巨噬细胞表达fgl2能促进其粘附、活化和趋化能力，fgl2在肿瘤浸润单核巨噬细胞上的表达能促进促血管生成细胞因子的分泌和肿瘤细胞转移。[目的]研究fgl2在HCCLM6细胞和THP-1细胞的下游信号传导途径,以揭示fgl2促进肿瘤生长和血管生成的作用机制。[方法]运用流式细胞仪液态芯片技术(CBA)检测fgl2干扰和未干扰的HCCLM6细胞在TNF-a刺激下的信号分子磷酸化水平改变；在HCCLM6细胞和THP-1细胞培养体系中分别加入分泌型fgl2及跨膜型fgl2蛋白,CBA技术检测HCCLM6细胞和THP-1细胞MAPK途径信号分子磷酸化水平的动态变化,免疫组织化学染色技术检测未干扰HCCLM6细胞和fgl2(-)HCCLM6细胞裸鼠皮下移植肿瘤组织磷酸化p38-MAPK和ERK表达。[结果]fgl2干扰降低了HCCLM6细胞静息状态下的ERK磷酸化水平及在TNF-a刺激下的p38-MAPK, ERK1/2, JNK和stat3磷酸化水平,且其抑制程度显著性高于特异性凝血酶抑制剂水蛭素对上述信号通路的抑制作用。外源性分泌型fg12(sfg12)及膜结合型fgl2蛋白单独刺激HCCLM6细胞不能激活下游MAPK信号途径的活化,而sfgl2刺激THP-1细胞能下调其JNK磷酸化水平,膜结合型fgl2与凝血酶原及钙离子共刺激能激活HCCLM6细胞和THP-1细胞p38-MAPK和ERK的序次磷酸化,此信号通路的激活能被水蛭素完全阻断。HCCLM6细胞裸鼠皮下移植肿瘤组织免疫组化染色分析显示,磷酸化ERK在fgl2干扰组肿瘤组织的表达水平显著低于未干扰组,半定量免疫反应积分与fgl2蛋白表达呈正相关,而磷酸化p38-MAPK在fgl2干扰组和未干扰组表达水平无显著差别。[结论]膜结合型龟12蛋白通过凝血酶依赖和非依赖途径促进HCCLM6细胞和THP-1细胞的MAPK信号分子磷酸化,从而促进肿瘤的生长和血管生成。分泌型fgl2可能通过下调单核巨噬细胞JNK磷酸化水平从而抑制其抗原递呈功能。