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新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种禽类急性、高度接触性传染病，被列为A类动物严重传染病，给世界各地养禽业带来巨大威胁。目前检测NDV的方法有血凝和血凝抑制试验、病毒分离法、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验等。这些方法有的存在费时、有的存在敏感性不高或特异性不强等缺点。 普通RT-PCR方法可以快速和特异性地检测很少拷贝的NDV的核酸，因此可以用于NDV的检测。但其难以控制核酸污染造成假阳性，而且需要使用剧毒的化学物。 荧光RT-PCR是近几年才发展起来的一项新技术。它既具有普通RT-PCR的高度灵敏性，又具有实时、快速、能够避免核酸污染和化学物污染等优点。SYBR Green模式的荧光RT-PCR是利用荧光染料SYBR Green Ⅰ与DNA双链结合后释放荧光的特点而建立的一种应用较广的荧光PCR技术。SYBR Green模式的荧光RT-PCR的优点是成本小，不需设计探针，只要有相关的引物就可以进行实时检测，并且适合于高度变异的基因检测。本研究建立了NDV和其毒力的SYBR Green模式的荧光RT-PCR检测技术。 本研究分析大量的NDV F蛋白的核苷酸序列，并在其裂解位点上下游保守区内附近，精心设计并筛选出一对通用引物，用于所有NDV毒株SYBR Green模式的荧光RT-PCR检测；优化检测条件，并将RT和PCR并为一步；以标准NDV毒株RNA为模板，用通用引物进行荧光RT-PCR扩增，扩增产物的Tm值一般在(88±1)℃范围内；经对10株未知毒株进行检测，并将其扩增产物进行序列测定，序列测定结果和荧光RT-PCR检测结果完全一致；实验还证明，此荧光RT-PCR比英文文献报道的普通RT-PCR方法更为敏感。 NDV毒力决定于其F蛋白的裂解位点的序列。依据这个原理，本研究还精心设计并筛选出另外两对引物，分别对应于NDV强毒毒株和弱毒毒株的F蛋白的裂解位点的序列，并依据此两对引物的SYBR Green模式的荧光RT-PCR扩增结果来判断NDV的毒力；以标准NDV强毒和弱毒毒株的RNA为模板，进行扩增，依据实验结果设立判断标准；用此判断标准对8株NDV未知毒株进行检测，结果和MDT检测结果完全一致，说明此方法可用于NDV强弱毒的鉴别。 另外，本方法可以以上述通用引物扩增的PCR产物为模板，进行毒力鉴别实验，从而继承了上述通用检测所具有的敏感性很高的特性。 本研究所建立的NDV及其毒力鉴定的荧光RT-PCR技术具有重要的兽医临床意义，在禽产品进出口上也有很大的应用价值。