论文部分内容阅读
目的：研究VEGF、STAT3和IGF-1R在大肠癌组织中的表达和临床病理因素之间的关系；观察SiRNA干扰VEGF基因对HT29大肠癌细胞系生物学特性的影响。方法：应用免疫组织化学S-P法,检测62例大肠癌及20例大肠正常黏膜组织中VEGF、 STAT3和IGF-1R的表达,分析其与大肠癌临床病理参数之间的关系：以脂质体lip-2000为载体,用针对VEGF特异靶点的siRNA转染入HT29人大肠癌细胞后,免疫细胞化学S-P法、Western Blot检测IVEGF蛋白表达变化,MTT法检测对细胞增殖的影响；流式细胞技术检测细胞凋亡。结果：(1)大肠癌组织VEGF、STAT3和IGF-1R阳性表达率显著高于正常大肠组织(P<0.05)。VEGF和SATA3的表达在有无淋巴结转移组和不同的Duke’s分期中亦有显著差异(P<0.05)。(2) VEGF和STAT3蛋白在大肠癌组织中的表达呈正相关(3)大肠癌组织中VEGF和IGF-1R蛋白的表达呈正相关(4) VEGF-siRNA转染HT29细胞后,免疫细胞化学结果显示：正常对照组,脂质体对照组及阴性错配对照组VEGF表达均呈深棕黄色强阳性表达,三组无明显差别；转染VEGF-siRNA组阳性细胞细胞浆呈浅棕黄色弱阳性表达。Western blot结果显示：VEGF-siRNA组细胞的蛋白条带亮度均明显低于正常对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组,VEGF-siRNA组VEGF蛋白表达均较对照组明显下降。(5)MTT检测结果：与阴性对照组相比,HT29细胞的VEGF-siRNA组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05)。VEGF-siRNA组中,不同时段(24h、48h、72h)肿瘤细胞增殖抑制率之间有显著差异(P<0.05),且随着作用时间的增加。(6)流式细胞术检测结果表明：与空白对照和阴性对照细胞组相比,VEGF-siRNA组均出现明显亚二倍体峰,VEGF-siRNA组的凋亡率显著高于正常对照组,两者比较差异有显著性(P<0.01)。结论：VEGF、STAT3和IGF-1R与大肠癌的发生、发展密切相关,并与大肠癌的预后有关。且三者具有协同作用,提示联合检测较单一检测更有意义。siRNA干扰VEGF基因能有效抑制人大肠癌细胞系VEGF蛋白表达,细胞增殖能力减弱,促进细胞凋亡。以VEGF基因为靶点,利用siRNA技术进行基因治疗有可能成为一种新的有效手段。