[目的]结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是最常见的消化道恶性肿瘤,具有较高的发病率和死亡率,严重危害人们的健康安全,对CRC的预防和治疗亟待解决。不产肠毒素型脆弱拟杆菌（non-enterotoxinproducing Bacteroides fragilis,NTBF）是新一代益生菌,本课题组前期研究发现腺瘤性结肠息肉患者中该细菌丰度明显低于健康人群,而腺瘤性结肠息肉患者是CRC的癌前病变,故本研究在课题组前期基础上就脆弱拟杆菌在CRC发生进程中的保护性作用和机制进行研究。[方法]1.建立脆弱拟杆菌和人结肠癌细胞LOVO、正常结肠上皮细胞hcoEPIC的“细菌-细胞共培养”模型,检测脆弱拟杆菌对不同结肠细胞的粘附、侵袭能力。2.TNF-α诱导建立LOVO细胞和hcoEPIC细胞体外炎症模型,并作以下分组:①正常对照组;②脆弱拟杆菌处理组,用浓度为1x108CFU/ml的细菌以感染复数（Multiplicity of Infection,MOI）为 100 的比例与 LOVO 和 hcoEPIC 细胞共培养24h;③TNF-α诱导组,用浓度为30ng/ml的TNF-α处理细胞24h;④脆弱拟杆菌+TNF-α组,先用脆弱拟杆菌与细胞共培养4h后,再加入TNF-α处理细胞24h。3.CCK8实验、FITC-AnnexinV凋亡检测、LDH释放实验、划痕实验分别检测不同处理组中细胞存活率、细胞凋亡、损伤、迁移。4.通过 Western-blot 方法检测各分组 TLR2、TLR4、MYD88、磷酸化 NF-κB p65、NF-κB p65、磷酸化IκBα IκBα的蛋白表达;qPCR方法检测TLR2、TLR4、MYD88、NF-κB、IκBα 的 mRNA 水平改变。5.通过ELISA方法检测NF-κB信号通路下游细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10 的表达。[结果]1.成功建立“脆弱拟杆菌-细胞共培养”模型以及TNF-α诱导hcoEPIC和LOVO细胞体外炎症模型,主要表现为脆弱拟杆菌单独处理24h对细胞形态和存活率无影响,TNF-α单独处理24h后细胞形态出现皱缩、破裂;细胞存活率降低、凋亡增加、迁移减慢;NF-αB信号通路相关蛋白和细胞因子激活等表现。2.粘附实验显示脆弱拟杆菌与LOVO和hcoEPIC细胞共培养4h后,粘附个数分别为（1.64±0.54）x106CFU/ml 和（0.86±0.17）x106CFU/ml（P<0.05）;侵袭实验显示脆弱拟杆菌对两株细胞均未表现出侵袭特性。3.CCK8实验和LDH释放实验显示脆弱拟杆菌能抑制由TNF-α诱导的LOVO和hcoEPIC细胞损伤、增加细胞存活率（P<0.05）;FITC-AnnexinV凋亡实验显示脆弱拟杆菌能抑制由TNF-α诱导的细胞的凋亡（P<0.05）;划痕实验显示TNF-α单独处理组LOVO细胞和hcoEPIC细胞的迁移明显被抑制（P<0.05）,但这种改变被脆弱拟杆菌逆转（P<0.05）。4.脆弱拟杆菌轻度下调LOVO细胞中TLR2蛋白的同时上调了 TLR4的表达（P>0.05）,在正常上皮细胞hcoEPIC中则刚好相反（P<0.05）;但均显著下调了两株细胞中MYD88的表达（P<0.05）。5.TNF-α单独处理24h后,两株细胞中磷酸化NF-κB p65、磷酸化IκBα的蛋白表达显著增加、NF-κB mRNA、IκBα mRNA水平增高（P<0.05）,表明NF-κB信号通路被激活,但用脆弱拟杆菌预处理后再加入TNF-α作用发现磷酸化NF-κB p65、磷酸化IκBα的蛋白表达被下调,NF-κB mRNA、IκBαmRNA水平降低（P<0.05）,表明脆弱拟杆菌抑制了 TNF-α诱导的NF-κB信号通路的激活。6.ELISA结果显示脆弱拟杆菌抑制了由TNF-α诱导的促炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的释放、促进抑炎性细胞因子IL-10产生。[结论]1.脆弱拟杆菌对不同结肠细胞粘附能力不同,但未表现出侵袭特性;其在体外可增加TNF-α诱导的结肠细胞存活率、抑制细胞凋亡和损伤、促进结肠上皮细胞迁移;2.脆弱拟杆菌可能通过下调TLR2/TLR4-MYD88-NF-κB信号通路,减少促炎细胞因子释放,增加抑炎细胞因子产生来对抗TNF-α诱导的炎症。