刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种具有机会致病性,专性细胞内寄生的原虫,弓形虫的速殖子能感染几乎所有的有核细胞,被认为是世界上最常见的寄生虫之一。弓形虫病（Toxoplasmosis）是一种由弓形虫引起的,呈世界性分布的重要人兽共患病,已被世界卫生组织（WHO）和联合国粮食及农业组织（FAO）列为全球最受关注的食源性寄生虫之一。弓形虫除了会给畜牧行业和食品工业带来庞大的经济损失外,作为一种机会致病性原虫,它还会对公共健康问题带来巨大的风险,严重威胁着世界公共卫生安全。然而目前仍没有一种药物能根治弓形虫病,因而快速、精确地对弓形虫感染做出诊断是弓形虫病防治的工作重点。弓形虫病的主要诊断方法有病原学检测、血清学检测、分子生物学检测和成像技术。在这几个方法中,病原学检测操作繁复耗时,对操作人员专业水平要求非常高;分子生物学检测和成像技术对仪器要求高,检测成本高企;血清学检测因其检测成本较低,操作便捷而被选作检测弓形虫感染最常用的方法。其中,酶联免疫吸附试验（ELISA）因其可检测抗体和抗原而被广泛用于体外诊断（In Vitro Diagnosis,IVD）。目前已有商品化的检测人、猪、猫、犬等弓形虫感染的间接ELISA试剂盒,但间接ELISA法灵敏度低,容易漏检误检。而基于单克隆抗体的双夹心ELISA灵敏度高,特异性强,但目前尚无相关试剂盒。本研究构建了弓形虫致密颗粒蛋白GRA7的原核表达载体pET32a-GRA7,并将其用热应激法转入大肠杆菌BL21（DE3）菌株中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG）诱导下表达出分子量约为46kDa的重组GRA7融合蛋白。重组GRA7蛋白利用Ni²⁺-NTA亲和层析法纯化,经过Western-blot试验,显示其有良好的反应原性,可作为抗原诱导小鼠产生抗体。将纯化GRA7蛋白免疫BALB/c小鼠,使用PEG融合骨髓瘤细胞和脾细胞,以弓形虫裂解蛋白作为筛选抗原,筛选出可产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株6C3。将杂交瘤细胞注入到小鼠腹腔内使其产生腹水,腹水经过Protein G Agarose纯化后得到纯化的单克隆抗体,抗体经SDS-PAGE电泳能观察到清晰的轻链和重链两条条带。纯化后的单克隆抗体亚类鉴定为IgG2a,轻链为κ,腹水效价为1:10⁴。Western-blot试验结果证明单抗6C3可识别重组rGRA7蛋白。