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黄芩苷(baicalin)作为常用中药黄芩的主要活性成分之一,是黄芩药材及多种含黄芩中药制剂的主要质量控制指标成分,因此,其质量分析控制显得十分重要。目前,黄芩苷的检测分析仍依赖于高效液相色谱法等仪器分析技术,但因仪器昂贵、检测成本较高、且样品前处理过程复杂等问题,无法满足大批量样品的现场快速检测。随着黄芩苷单克隆抗体的成功制备,基于黄芩苷单抗的酶联免疫分析技术作为一种新型检测方法,具有灵敏度高、特异性强、准确可靠等优势,可以实现大批量样品的同时快速检测,是色谱分析技术等仲裁分析方法的一种有益的技术补充和替代手段,日益得到重视。目的：基于黄芩苷单克隆抗体,优化并建立一种快速、灵敏的黄芩苷间接竞争ELISA分析技术,研制出标准化的黄芩苷ELISA快速检测试剂盒。方法：1、利用辛酸法及蛋白G柱对黄芩苷单克隆抗体进行逐级纯化。2、采用间接竞争ELISA方法,对包被原的工作浓度、包被模式、封闭液种类、单抗最佳工作浓度、反应时间、显色时间、竞争抗原和单抗最佳容量配比、缓冲体系的离子强度和pH及助溶剂的含量等可能会影响其检测限、灵敏度、准确度等方法学指标的因素进行考察。3、通过批内差、批间差、加样回收率试验、单抗保护剂、酶标板保存条件等考察分析方法的精密度、准确度及试剂盒的稳定性。4、对生物样品进行黄芩苷添加回收率试验考察方法的准确度,并通过板内差和板间差测试考察方法的精密度。5、将自制黄芩苷ELISA快速检测试剂盒应用于黄芩药材、口服液及生物样品中黄芩苷的含量测定。结果：1、经辛酸及蛋白G柱纯化后获得了纯度较高的黄芩苷单克隆抗体。2、通过条件优化得到的最终反应条件为：CBS作为包被缓冲液,包被浓度为1：8000,包被方式采用37℃10min+4℃12h；以5%脱脂奶粉作为封闭液37℃下封闭2 h；0.01M PBS (pH=7.4)作为工作缓冲液,单抗工作浓度为1：40000,60 μL标准溶液+40μL抗体作为最佳容量配比,竞争反应时间为1 h；显色时间应控制在20 min左右。3、基于上述条件,优化后黄芩苷ELISA的检测灵敏度(IC50)为23.93 ng/mL,检测线性范围为3.95-125 ng/mL平均回收率为104.6%。整体检测工作时间为4 h。4、在2℃～8℃条件下,试剂盒的保质期至少在半年以上。该试剂盒批内变异系数不超过9.11%,批间变异系数最大为12.21%。5、生物样品空白基质加样回收率在68.1%-111.3%之间,变异系数均小于15%,属正常波动范围。不同空白基质中所建立的ELISA的板内变异系数和板间变异系数均小于13.6%。6、中药材及口服液中黄芩苷的含量测定结果均与HPLC测定结果具有较高的一致性。结论：基于制备并纯化得到的灵敏度高、特异性强且纯度较高的黄芩苷腹水型单抗,通过反应条件的筛选与优化,建立了一种快速、灵敏的黄芩苷ELISA免疫分析方法,初步研制出了灵敏度高、稳定性好,可用于中药材、口服液及生物样品中黄芩苷含量测定的黄芩苷ELISA快速检测试剂盒,为黄芩苷荧光免疫分析试剂盒的研制奠定了基础。