【摘 要】
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背景:子宫颈癌（Cervical cancer CC）是女性常见的妇科恶性肿瘤之一,目前发病机制尚不明确。肿瘤抑制基因p16基因是研究较广泛的因子,研究发现p16基因启动子区域Cp G岛甲基化可使p16基因失活,引起细胞异常增殖参与肿瘤的发生发展。甲基转移酶（DNMTs）通过调节基因启动子区域Cp G岛甲基化水平影响基因的表达,是催化甲基化反应的关键酶。研究发现D NMT3a/3b在多种恶性肿瘤中
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背景:子宫颈癌（Cervical cancer CC）是女性常见的妇科恶性肿瘤之一,目前发病机制尚不明确。肿瘤抑制基因p16基因是研究较广泛的因子,研究发现p16基因启动子区域Cp G岛甲基化可使p16基因失活,引起细胞异常增殖参与肿瘤的发生发展。甲基转移酶（DNMTs）通过调节基因启动子区域Cp G岛甲基化水平影响基因的表达,是催化甲基化反应的关键酶。研究发现D NMT3a/3b在多种恶性肿瘤中高表达,通过诱导抑癌基因启动子区域Cp G岛甲基化,使抑癌基因失活并抑制该基因在细胞中的表达,使细胞周期紊乱,促进癌细胞的不断增殖与转移,导致癌症的发生发展。本研究通过测定宫颈癌细胞中p16基因Cp G岛甲基化状态,并通过调控DNMT3a/3b表达后测定p16基因Cp G岛甲基化状态变化,探讨二者及其可能存在的调节机制在宫颈癌发生发展中的作用,为今后临床宫颈癌的精准靶向药物治疗带来新思路。目的:了解p16基因启动子区域Cp G岛在宫颈癌细胞株中的甲基化状态,通过沉默宫颈癌细胞DNMT3a/3b表达后测定p16基因Cp G岛甲基化状态变化,探讨分析p16基因甲基化在宫颈癌细胞中作用。方法:1、培养两组细胞株:（1）宫颈癌细胞株Hela;（2）正常宫颈上皮细胞株ECT-1/E6E7;2、采用甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR,MSP）测定两组细胞株中p16启动子区域Cp G岛甲基化状态;3、沉默DNMT3a/3b表达后测定p16基因Cp G岛甲基化状态变化。结果:1、p16基因启动子Cp G岛甲基化在Hela细胞中阳性,ECT1/E6E7细胞中阴性;2、Control组和pc DNA3.1-NC转染组p16甲基化阳性,pc DNA3.1-DNMT3a/3b sh RNA转染组p16部分甲基化。结论:1、在宫颈癌细胞中存在p16基因启动子Cp G岛的甲基化,正常宫颈细胞无甲基化改变。2、沉默DNMT3a/3b表达后p16甲基化水平下降,提示D NMT3a/3b可能影响p16启动子Cp G岛甲基化水平导致宫颈癌的发生。
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