随着抗生素及创伤性检查、诊疗手段的广泛使用，近年由条件致病菌导致的院内感染日益增多。其中黄杆菌属细菌因其常表现出对第三代头孢菌素、氨基糖甙类和碳青酶烯类抗生素的高度耐药而备受重视，正成为重要的院内感染致病菌。虽然迄今报道的院内黄杆菌感染率仅为0.4%~ 0.8%，但有资料表明新生儿及儿童发生院内黄杆菌肺炎的病死率高达55.0%~ 75.0%，因此，加强对黄杆菌特别是耐药性发生的研究对于控制其感染和合理应用抗生素治疗具有重要的理论意义和实践价值。研究发现黄杆菌除发生外膜通透性屏障，阻止抗生素渗入细菌外，产生水解?-内酰胺类抗生素的?-内酰胺酶是其发生头孢菌素和碳青酶烯类抗生素耐药的主要原因，对黄杆菌产?-内酰胺酶的研究已引起各国研究人员的重视。由于院内黄杆菌感染在近年才被发现，不论国内外对其耐药性的研究均处于起步阶段。从1999年至今，关于黄杆菌产超广谱?-内酰胺酶和金属酶国外已有少量报道，而国内对于黄杆菌属引起的院内感染的研究大多仍停留在个案分析阶段，因此，本研究选择了第三军医大学第一附属医院（西南医院）临床分离的院内感染黄杆菌属6株，在测定其对常用抗生素的敏感性的基础上，以纸片法筛查其产?-内酰胺酶株，采用聚合酶链反应及基因测序、同源性分析等方法研究其产?-内酰胺酶的类型及基因介导方式，并结合临床感染病例对预防黄杆菌属细菌感染的护理对策进行了分析，以期明确国内院内感染黄杆菌属对?-内酰胺类抗生素的耐药机制，为指导临床合理使用抗生素治疗黄杆菌属细菌感染、制订预防对策提供实验依据。本研究分四部分进行：1.临床分离黄杆菌对抗生素敏感性及产?-内酰胺酶的初筛2.院内感染黄杆菌?-内酰胺酶基因的PCR分析 3.黄杆菌携带?-内酰胺酶基因PCR扩增产物测序及同源性分析 4.黄杆菌属细菌院内感染及护理对策分析1.方法1.1 采用K-B纸片法和琼脂稀释法测定其MIC，分析各菌株对药物的敏感性；用头孢硝噻吩纸片检测其产?-内酰胺酶情况；双纸片协同法粗筛产ESBLs菌株。<WP=10>1.2 针对不同类别的?-内酰胺酶序列，设计针对性引物，分别以细菌的染色体和质粒为模板，进行PCR扩增，分析确定细菌产?-内酰胺酶的类型。1.3 PCR扩增产物测序和同源性比较。1.4 黄杆菌属细菌感染的护理对策分析2. 结果2.1 黄杆菌对抗生素的敏感性 本研究中6株黄杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢哌酮、头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟、氨曲南等β-内酰胺类、单酰胺类抗生素表现高度耐药；对碳青霉烯类抗生素的敏感性相对较高；对环丙沙星等喹诺酮类抗生素敏感。2.2黄杆菌产β-内酰胺酶及ESBLS的情况 纸片法显示，6株黄杆菌均携带有?-内酰胺酶基因，双纸片协同法初筛出02-203、02-237、02-244、02-258及02-372等5株细菌可能为产ESBLs株；PCR扩增检测证实6株黄杆菌均携带有?-内酰胺酶基因，02-237、02-244、02-258等3株菌为产ESBLs株。产?-内酰胺酶及ESBLs是西南医院临床分离黄杆菌对?-内酰胺类抗生素出现耐药的机制。2.3 黄杆菌产?-内酰胺酶PCR检测及测序和同源性分析结果 PCR结果显示，6株黄杆菌的染色体模板获得了与预期大小相符的TEM、SHV及PSE-1引物的阳性扩增片段，质粒模板也获得了与预期大小相符的AmpC、TEM、SHV、CTX-M-1、PSE-1、OXA-1及Sme-1引物的阳性扩增片段。PCR扩增产物序列分析和同源性比较证实，又质粒介导的通用引物、TEM及PSE-1引物PCR扩增产物的序列与已知的blaAmpC、blaTEM和blaPSE-1基因序列的同源性分别为100%、99%和98%。其余的PCR扩增产物序列与文献报道的相应?-内酰胺酶基因同源性较差。2.4预防黄杆菌属细菌感染的护理对策 根据本研究细菌来源的临床病例结合文献分析，黄杆菌感染的危险因素包括：存在基础性疾病、不合理的抗生素使用史、机体自身防御、抵抗能力低下、创伤性检查、治疗史、较长时间的住院史、糖皮质激素使用史等；护理对策包括进行抗生素教育、严格病房管理制度、落实各项消毒、灭菌措施、严格按操作规程进行各项医护活动、加强患者及相关人员身体的清洁、卫生、增强易感人群的自身抵抗力、免疫力以及正确评估易感人群存在的合作性护理问题等方面。3 结论3.1西南医院临床分离的黄杆菌属细菌对?-内酰胺类抗生素耐药性高,对氟喹诺酮类抗生素敏感。3.2研究所用的临床分离黄杆菌属产?-内酰胺酶及ESBLs是其对?-内酰胺类抗生素产生耐药的主要机制。<WP=11>3.3黄杆菌属细菌产β-内酰胺酶呈现多样性,同一种?-内酰胺酶可由染色体和质粒共同介导，同一菌株可携带多种?-内酰胺酶基因。?3.4为控制和预防黄杆菌属细菌感染,应对医护人员进行抗生素教育、严格按操作规程进行各项医护活动、加强患者及医护人员的身体清洁及增强易感人群的自身抵抗力等。