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随着水体富营养化加剧,藻类所引起的水污染问题已越来越引起人们的关注,藻毒素污染已成为一个全球性的环境卫生问题。本文研究罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏Ⅰ相去毒酶细胞色素P450 1A(CYP1A)、催化微囊藻毒素(microcystin-LR,MC-LR)与还原型谷胱甘肽(GSH)加合去毒代谢的Ⅱ相去毒酶可溶性谷胱甘肽S-转移酶(solubleglutathione S-transferase,sGSlr)、抑制脂过氧化物产生的的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX),以及抑制微囊藻毒素诱发活性氧导致的肝细胞凋亡的解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)等基因,经活体腹腔注射MC-LR和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后表达水平的诱导变化,以期为罗非鱼微囊藻毒素去毒分子机理研究及转基因罗非鱼微囊藻毒素生物去毒器研发提供资料。 通过简并引物PCR从罗非鱼肝脏克隆sGST、GPX、UCP2基因cDNA核心序列,并应用5’RACE和3’RACE技术分别扩增罗非鱼肝脏sGST基因eDNA序列5’末端和3’末端序列而获得其cDNA全序列。序列分析表明,罗非鱼肝脏sGST基因cDNA全序列长861 bp,其中5’非翻译区(5’-UTR)为25 bp,3’非翻译区(3’-UTR)为167 bp,开放阅读框(ORF)为669 bp,编码222个氨基酸,包含2个功能域:N-末端功能域(GSH结合位点)和C-末端功能域(底物结合位点)。应用Genome Walker方法进一步克隆得到罗非鱼sGST基因5’侧翼区序列366 bp,并发现在该调控序列上存在多个潜在调控元件。罗非鱼肝脏GPX、UCP2基因cDNA核心序列分别长280 bp、776 bp,编码92、258个氨基酸。 通过对罗非鱼(5-8 g)活体腹腔注射亚致死量MC-LR(50μg kg-1 bwt),LPS(2 mg kg-1 bwt)和MC-LR+LPS(50μg kg-1 bwt+2 mg kg-1 bwt)24 h后,发现微囊藻毒素对罗非鱼肝脏sGST基因表达有显著的诱导作用(P<0.05),注射MC-LR 24 h后sGST基因mRNA表达水平上调80%。注射MC-LR和LPS 24 h后,罗非鱼肝脏GPX基因mRNA表达水平出现明显的升高趋势,但均未出现显著性的变化(P>0.05)。另外,注射LPS 24h对罗非鱼肝脏UCP2基因表达有显著的诱导作用(P<0.05),注射微囊藻毒素24 h对UCP2基因mRNA表达水平也有明显的升高趋势,但未出现显著性的变化(P>0.05)。肝脏细胞色素P450 1A(CYP1A)基因mRNA表达水平在暴露于MC-LR、LPS或者