目的：通过了解顺铂耐药膀胱癌细胞中DNA甲基化谱的改变，探索与发生顺铂耐药密切相关的基因的甲基化及其蛋白表达的变化，为阐明膀胱癌化疗耐药机制提供新的实验依据。方法：（1）顺铂耐药膀胱癌细胞株的建立：利用顺铂浓度梯度递增法(0.2-2.0mg/L)，在T24膀胱癌细胞中建立顺铂耐受的细胞株亚型（T24/DDP），并对细胞的各项生物学指标进行检测，包括顺铂敏感性、细胞形态学、细胞生长曲线及细胞周期等。（2）顺铂耐药膀胱癌细胞DNA甲基化谱分析与耐药相关甲基化基因的筛选：DNA甲基化芯片对T24及T24/DDP细胞基因组的DNA甲基化谱进行分析，并通过统计学方法，筛选高甲基化，及低甲基化修饰基因。利用real time-PCR方法对筛选出的具有表达差异的甲基化修饰基因进行分析，并结合文献资料，最终采用MSP法，对筛选出的甲基化修饰基因进行进一步的验证分析。（3）通过5-氮杂-2-脱氧核苷去甲基化了解顺铂耐药膀胱癌细胞生物学的作用；并对细胞生物学指标进行检测。（4）采用5-氮杂-2-脱氧核苷去甲基化了解逆转顺铂耐药膀胱癌细胞的分子机制：利用real time-PCR及western blot方法，对T24/DDP及经5-氮杂-2-脱氧核苷去甲基化处理T24/DDP细胞中关键基因及其蛋白的表达进行分析。结果：（1）成功建立顺铂耐药的膀胱癌细胞（T24/DDP）： DDP敏感性实验表明，在20ug/ml浓度的DDP处理下，T24细胞死亡率接近100%，而同样浓度下顺铂耐受的细胞株亚型T24/DDP细胞的死亡率则是30%。细胞生长曲线表明，T24与T24/DDP细胞的倍增时间分别为72.5和90.2小时。细胞形态学观察表明，T24与T24/DDP细胞形态学无明显差异。细胞周期分析表明，T24/DDP细胞中G0/G1期细胞比例显著增加，G2/M期细胞下降。（2）顺铂耐药膀胱癌细胞DNA甲基化差异基因筛选：利用DNA甲基化谱芯片对T24及T24/DDP两个细胞系的基因组DNA甲基化谱进行分析，发现1120个甲基化差异位点；并筛选出40个高甲基化，18个低甲基化修饰基因。然后通过realtime-PCR方法对该58个差异甲基化修饰基因的表达进行了分析，发现其中30个基因的表达有统计学差异。结合文献资料，又筛选出和本研究相关基因20个，采用MSP法，对这些基因的甲基化修饰在细胞水平上又进行了验证分析，最终筛选出与甲基化谱芯片结果一致的15种基因，包括14种高甲基化和1种低甲基化修饰基因。（3）5-氮杂-2-脱氧核苷去甲基化对顺铂耐药膀胱癌细胞的生物学作用：经去甲基化处理后，之前发现的14种高甲基化修饰差异基因中的7种基因的高甲基化修饰被改变：ABCC6， CCNA1， HPP1， ITGA4， RASSF1A, RUNX3，TMS1。同时去甲基化处理后，T24/DDP细胞对于顺铂的敏感性显著提高、细胞凋亡比例增加、S期细胞比例显著增加。（4）5-氮杂-2-脱氧核苷去甲基化逆转顺铂耐药膀胱癌细胞的分子机制研究：利用real time-PCR和western blot方法的分析结果表明，上述7种基因（ABCC6，CCNA1， HPP1， ITGA4， RASSF1A, RUNX3，TMS1），经5-氮杂-2-脱氧核苷去甲基化处理后，其mRNA及蛋白的表达水平显著增加。结论：（1）顺铂浓度梯度递增法所建立的T24/DDP细胞株对顺铂具有很好的耐受性，可以作为体外模型用于顺铂耐药机制的研究。（2）膀胱癌细胞发生顺铂耐药时，细胞基因组存在广泛的DNA甲基化修饰改变。（3）5μM5-氮杂-2-脱氧核苷处理T24/DDP细胞，能使部分高甲基化修饰基因发生去甲基化，而提高T24/DDP细胞对于顺铂的敏感性。（4）ABCC6， CCNA1， HPP1， ITGA4， RASSF1A, RUNX3，TMS1等7种基因的甲基化修饰可能在介导顺铂耐受作用机制中发挥重要作用。