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研究背景与目的紫外线光疗(包括UVA和UVB)是皮肤病治疗的重要手段之一，中波紫外线UVB主要作用于表皮，波长为311-313nm的窄波UVB是UVB最有效的成分。近年来，NB-UVB被广泛地应用于临床治疗白癜风、银屑病、特应性皮炎及其它皮肤病，并取得了较好的疗效。表皮的黑素细胞、角质形成细胞均是NB-UVB辐射的主要靶细胞。本研究分两个部分探讨NB-UVB辐射对表皮黑素细胞、角质形成细胞的影响：1．不同NB-UVB辐射剂量和作用时间对体外培养的白癜风患者远离皮损外观正常皮肤及皮损边缘处皮肤培养的黑素细胞形态、增殖活性及黑素合成功能的影响，并以正常人皮肤培养的黑素细胞为对照，确定黑素细胞增殖率和黑素合成的最高点，指导临床设定NB-UVB照射治疗白癜风最佳的间隔时间。2．NB-UVB辐射对人角质形成细胞株-HaCaT细胞凋亡形态、增殖活性及凋亡率的影响与NB-UVB辐射剂量及检测时间的相关性，探讨NB-UVB治疗银屑病的作用机理及最佳治疗频率。研究方法1．体外培养白癜风患者远离皮损外观正常皮肤、皮损边缘处皮肤及正常人皮肤黑素细胞，采用HMB-45单克隆抗体免疫组化法对培养细胞进行鉴定；倒置显微镜观察NB-UVB辐射对黑素细胞形态的影响；MTT法和NaOH法检测NB-UVB辐射剂量(20—100 mJ／cm~2)和作用时间(辐射后48h、72h、96h)对黑素细胞增殖活性和黑素合成的作用。2．以人角质形成细胞株-HaCaT细胞为研究对象，以不同剂量(20—100mJ／cm~2)的NB-UVB辐射体外培养的HaCaT细胞，观察辐射后不同时间(24h、48h、72h)HaCaT细胞损伤的形态学和增殖活性的变化；流式细胞仪检测NB-UVB辐射对HaCaT细胞凋亡的影响。结果1．NB-UVB辐射黑素细胞后，细胞肿胀，树突缩短增粗，黏附性下降。NB-UVB辐射后48h，在实验剂量下可提高黑素细胞的黑素合成能力，辐射剂量≥60mJ／cm~2可抑制白癜风患者远离皮损外观正常皮肤及正常人皮肤培养的黑素细胞增殖，而辐射剂量≥40mJ／cm~2即可对白癜风皮损边缘处皮肤培养的黑素细胞增殖产生抑制作用；NB-UVB辐射后72h、96h，在实验剂量下可促进黑素细胞增殖和黑素合成，对白癜风远离皮损外观正常皮肤及正常人皮肤黑素细胞作用更明显，NB-UVB辐射后72h黑素细胞增殖率和黑素含量达到最高点。2．NB-UVB辐射对HaCaT细胞具有明显的损伤作用。镜下表现为细胞皱缩、碎片增多等形态变化；在接受不同剂量NB-UVB辐射后48h内，随着辐射剂量的增加，具有凋亡形态特征的HaCaT细胞逐渐增多，细胞增殖活性逐渐降低，48h后受损程度较轻，并有逐渐恢复迹象；在辐射后24h内，20-100 mJ／cm~2的NB-UVB辐射可剂量依赖性地诱导HaCaT细胞凋亡。结论1．白癜风皮损边缘处皮肤培养的黑素细胞黑素合成功能异常，对NB-UVB辐射高度敏感，受光损伤的程度较重。2．稳定期白癜风患者远离皮损外观正常皮肤培养的黑素细胞与正常人皮肤培养的黑素细胞具有相似的生物学特性。3．NB-UVB辐射后72h黑素细胞增殖率和黑素含量最高，白癜风患者采用每周2次照射NB-UVB为最佳治疗间隔时间。4．NB-UVB辐射可使HaCaT细胞增殖活性呈剂量依赖式递减，且NB-UVB辐射后48hHaCaT细胞光损伤的形态学变化和增殖抑制效应最明显，提示NB-UVB治疗银屑病的最佳照射频率为3次／周。5．NB-UVB辐射诱导的HaCaT细胞凋亡具有显著的剂量依赖性。6．NB-UVB治疗银屑病的局部作用可能部分通过诱导角质形成细胞凋亡，抑制细胞增殖，实现对角质形成细胞过度增殖的调控。