背景：肺腺癌是肺癌中最常见的病理类型,约占肺癌总发病人数的30%,五年生存率约17%。在2004年的WHO分类中,定义了腺癌的一种特殊的亚型——细支气管肺泡细胞癌(bronchioloalveolar carcinoma, BAC),呈非侵袭性鳞片状生长模式,没有间质、淋巴管、血管及胸膜的侵袭。根据其病理学特征,BAC可进一步分为黏液性,非黏液型和混合型,其中以非黏液型最常见。越来越多的文献表明,非黏液型BAC是不典型腺瘤样增生(atypical adenomatous hyperplasia, AAH)发展到早期周围型侵袭性腺癌的中间阶段。依据最新的腺癌分类标准,BAC属于腺癌的一种浸润前病变——原位癌(adenocarcinoma in situ, AIS),其预后良好,但有向侵袭性腺癌转化的潜能。目前认为肺癌的发生、发展是一个多因素作用、多基因参与的多步骤有序的复杂过程,从良性病变到高度恶性之间有不同程度的良恶性演变。从AAH发展到非粘液型BAC最终演变为含有BAC特征的肺腺癌(adenocarcinoma with BAC features, AWBF),这一过程伴随有多种基因和分子遗传学改变。然而,基因组改变必然会通过蛋白质组的改变来实现。蛋白质组学研究能够动态地反映肿瘤发生、发展各阶段蛋白质种类和数量的变化,因此,应用蛋白质组学技术寻找在BAC和AWBF中特异表达的蛋白,将为探讨BAC向ADC的内在转化机制,寻找肿瘤预后特异标记物或新治疗靶点提供新的线索。本课题拟利用双向凝胶电泳联合质谱分析的方法,对BAC和AWBF组织的蛋白质表达图谱进行分析,并进一步在组织标本中进行验证,分析差异蛋白在肺腺癌中的表达情况。全文共包括两部分内容：第一部分细支气管肺泡细胞癌与侵袭性腺癌的差异蛋白表达分析及鉴定目的：比较BAC与AWBF的蛋白表达图谱,筛选鉴定与BAC恶性转化相关的差异蛋白方法：提取BAC与AWBF组织的总蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离获得二者高质量的蛋白表达图谱,经Imagemaster及PD-QUEST软件比较分析,筛选二者间的差异蛋白点,通过MALDI-TOF质谱鉴定差异蛋白。结果：获得了分辨率高、重复性好的BAC与AWBF的双向电泳图谱。经Imagemaster及PD-QUEST软件分析获得差异倍数2倍以上的蛋白质点共有37个,其中21个在AWBF中上调,16个下调。经质谱鉴定了10种蛋白,鉴定的蛋白涉及VDAC2 (voltage-dependent anion-selective channel protein 2,电压依赖性阴离子选择性通道蛋白2)、Serpin A1 (serine protease inhibitor A1,丝氨酸蛋白酶抑制剂A1)、MRE11 (meiotic recombination gene 11 homolog A,线粒体重组基因11)、ANXA2 (Annexin2,膜联蛋白2)、PGK1 (phosphoglycerate kinase 1,磷酸甘油酸激酶1)、PDIA3 (protein disulfide-isomerase A3,人蛋白二硫化物异构酶)等。结论：应用双向凝胶电泳技术整体展示了BAC及AWBF的蛋白表达谱,二者图谱相近,表现为蛋白表达水平量的改变。进一步筛选鉴定出包括MRE11,VDAC2等10个与BAC恶性转化相关的差异蛋白,为进二步研究肺腺癌的发生发展机制提供新的线索。第二部分MRE11在BAC及侵袭性腺癌组织中的表达目的：验证筛选得到的差异蛋白MRE11在BAC组织及侵袭性腺癌组织中的表达情况方法：提取BAC及AWBF的总蛋白,以Western blot技术检测各组织内MRE11蛋白的表达。收集5例BAC及20例侵袭性腺癌术后石蜡标本,行HE染色,再次经病理确诊。应用免疫组织化学S-P法检测MRE11蛋白在BAC及侵袭性腺癌中的表达情况。结果：Western blotting检测结果提示,相比于BAC, MRE11在AWBF组织中的表达水平显著增高。对肿瘤标本行免疫组化染色结果显示,BAC组MRE 11蛋白免疫组化染色积分为3.8±1.9,ADC组为5.4±0.9,明显高于BAC组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论：通过Western blotting检测,获得了满意的蛋白免疫印迹图谱,验证了双向电泳结果的可靠性,证实MRE11蛋白在BAC与AWBF间存在表达差异。进一步行免疫组化染色发现,侵袭性腺癌组织中MRE11的表达水平较BAC明显增高,推测该蛋白与BAC恶性转化相关,其在肺腺癌中的作用有待于进一步的研究,有望成为肺腺癌诊疗的新靶点。通过上述研究,得到结论如下：1、应用双向凝胶电泳技术整体展示了BAC及含有BAC特征的侵袭性腺癌组织的蛋白表达图谱,并筛选鉴定出10个差异表达的蛋白质,包括VDAC2, SerpinA1、MRE11、Annexin2、PGK1、PDIA3等,推测它们可能与BAC的恶性转化相关。2、与BAC相比,MRE11蛋白在侵袭性腺癌组织中的表达水平明显增高,推测该蛋白与BAC恶性转化有关,其在肺腺癌中的作用有待于进一步的研究,有望成为肺腺癌诊疗的新靶点。