前言 脊髓损伤是目前危害我国人群的一大疾病，在我国乃至世界范围均有很高的致残率。继发性损伤的治疗是脊髓损伤治疗的关键，也是目前的一大难题。胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)，具有广泛的生物学作用，有实验证明在脑组织的缺血缺氧性损伤中有重要的治疗作用。但对脊髓损伤的治疗研究却罕见报道。笔者应用大鼠脊髓损伤模型，早期局部给予胰岛素样生长因子Ⅰ，测定48小时后大鼠的后肢运动功能、存活的运动细胞数目及Bcl-2蛋白的表达，观察胰岛素样生长因子对脊髓损伤后脊髓截瘫和神经细胞的影响。 材料和方法 1．动物分组： 健康WISTAR大鼠22只，雌雄不限。体重240--260克，随机分为3组：(1)单纯损伤组：脊髓损伤+生理盐水8只。(2)IGF-Ⅰ组：脊髓损伤+胰岛素样生长因子8只。(3)胰岛素组：脊髓损伤+胰岛素6只。在损伤后48小时检测大鼠后肢运动功能(Tarlov法)、脊髓前角运动细胞数目及Bcl-2蛋白表达情况。 2．脊髓损伤模型的建立： 应用改良Allen打击法。以10％的水合氯醛腹腔内注射麻醉(2ml／kg)，将大鼠固定于手术台上，腰背部脱毛，消毒，铺巾。以脊柱为中心纵行切开背部皮肤及皮下组织，剥离两侧椎旁肌。暴露T6-T8脊突椎板，咬除T7脊突和椎板显露硬膜，按改良的Allen打击法将打击头(直径2毫米)放置在硬膜上，并与打击器连接，先使重锤＊）自然下垂，重物高度调整至5厘米，打开扳机，重物自然下落，打击重量为50cm．g。致伤脊髓，分别注人胰岛素（胰岛素组人胰岛素样生长因子V胰岛素样生长因子组人单纯损伤组注人等量等渗盐水。 3．病理标本的制备： 术后48 ／J＼时用10％的水含氯醛K）腹腔内注射麻醉，左心室插管后剪开右心耳，先灌注等渗盐水250毫升，再灌注体积分数为4％的多聚甲醛250毫升，然后切取以伤段为中心长约20毫米长的脊髓，多聚甲醛固定，常规石蜡包埋连续切片，片厚6tun。随机计数12张切片（损伤段，损伤上段和损伤了段各4张人 4．检测指标及方法： O）后肢运动功能评估： 应用改良的 Troy分级法：0级：无运动；二级：轻微运动；2级：扶持能坐；3级：能坐；4级：微跳；5级：正常。 p）脊髓运动细胞数目计数： 每一标本所得的12张切片中的6张（损伤上段、损伤中段、损伤下段各2张）经HE染色，计数每张切片中的脊髓前角运动细胞数目，取其平均值。 （3）BCI—2蛋白的检测： 兔疫组化SP法。Bcl－2单克隆抗体（购自博士德公司人参照SP试剂盒说明书进行操作。镜下记录阳性细胞数。 5．统计方法： 应用 SPSS．0统计软件进行数据处理。用 Mann Witncy UTest进行Taro评分的检验。用方差分析比较运动细胞数目和BCI—2阳性细胞（P＜0．05）。 ·2· 结 果 1．大鼠后肢运动功能评估： 单纯损伤组中有4只在术后6小时即发生截瘫，另外4只在 术后24到48小时进展至截瘫。而IGFJ组的大鼠在术后48 ／J’ 时仍然保持后肢运动功能在4一级。尽管胰岛素组中有2只大 鼠的后肢运动功能保持在4一级，但其他4只在术后24－－48 ／J’ 时进展至截瘫。 2．髓灰质前角运动神经细胞数目： 组织学检查见单纯损伤组脊髓损伤明显，镜下表现为脊髓前 角运动细胞数目减少，NISSI ／J’体消失、运动神经细胞核溶解以及 脊髓灰质中有空泡形成。相反IGF－I组的镜下未见上述表现。 细胞形态良好，无明显空泡形成。尽管胰岛素组的运动细胞数目 未见明显减少，但具有与单纯损伤组类似的脊髓损伤的镜下表现。 运动细胞数目的统计结果表明IGF一互组与单纯损伤组比较有明 显的统计学意义K＜o．05人 3．BCI－2蛋白阳性细胞数目： 手术后各组均见伽—2表达，但对照组和胰岛素组的表达 （分别为 19．20＊2．29和22．32 t6．77）显著低于 IGF一互组（32．3二 。4．“），（P＜0．05）。研究表明，术后48小时1叮一二显著增加 了比一2蛋白的表达，虽然胰岛素组的运动细胞数目与IGF组相 比并不减少，但伽—2阳性细胞数目却明显低于IGF组。 讨 论 脊髓损伤是一种具有很高致残率的严重疾病，其损伤机理很 复杂，但神经轴索不能再生是脊髓损伤后功能永久丧失的主要原 ·3·因，为给脊髓轴突的再生创造有利的环境，各国学者进行了多方面研究，采用的方法主要集中在以下几个方面：厂）生长抑制因子抗体；p）电刺激；根外周神经移植；K）雪旺细胞移植；O）胚胎组织移植；K）嗅鞘胶质细胞移植；（）神经营养因子。 IGFJ是由70个氨基酸残基组成的具有内分泌、自分泌及旁分泌的单链多肽，在体内的表达受到生长激素的调