水曲柳胚性愈伤组织的诱导及组培苗悬浮培养的研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:JK0803_shijiwu
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水曲柳(Fraxinus mandshurica Rupr.)为木犀科(Oleaceae)白蜡树属(Fraxinus.)高大乔木,是重要的经济作物。木材利用价值极高,是著名的军用材种和高级的家具用材。但此树种的资源历来非常贫乏,已被列为渐危种。水曲柳主要用种子繁殖,也可用扦插繁殖和萌蘖更新。因各种外界因素的影响,水曲柳属于繁殖缓慢的树种之一。因此,可以利用组织培养技术来繁殖水曲柳。从目前研究来看,通过愈伤组织再分化途径繁殖水曲柳比较困难,因此,本论文在相关学术文献基础上,通过对水曲柳不同外植体进行培养条件的筛选,找出诱导水曲柳胚性愈伤组织的培养条件,建立水曲柳胚性愈伤组织悬浮培养体系,为今后通过单细胞培养诱导水曲柳体细胞胚奠定基础;同时,本论文尝试不同培养方式繁殖水曲柳组培苗,初步选出适合水曲柳组培苗繁殖的培养方式,为后期优化和规模化繁殖奠定基础。通过以上研究得出如下结论:1、筛选出了水曲柳胚性愈伤组织诱导条件并建立了悬浮培养体系:以叶片或叶柄外植体,WPM 为基本培养基,添加 0.1 mg/LNAA,0.5mg/LIBA,1.5mg/L6-BA,0.3mg/L TDZ,30 g/L蔗糖,5.6 g/L琼脂,光照条件下培养1-2个继代可获得松散的、近似于胚性的愈伤组织,利用相同的培养基进行液体悬浮培养,接种量2 g/50 mL中,120 r/min震荡培养18 d生长量达到最高,增长率接近500%。以水曲柳小孢子为外植体,初步得到了近似于体胚的细胞团。2、初步建立了水曲柳组培苗繁殖方式:以WPM为基本培养基,添加2.0mg/L6-BA,0.15 mg/LNAA,20 g/L蔗糖,进行液体浸没式震荡培养,有利于水曲柳组培苗顶芽和侧芽的萌发。3、初步探究了增加氮、磷浓度,对水曲柳胚性细胞增殖和组培苗繁殖的影响:氮源和磷源的过量,均抑制水曲柳胚性细胞的生长,但对水曲柳顶芽伸长具有促进作用,增加氮源800 mg/L或增加磷源170 mg/L可以促进顶芽的伸长。
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