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背景神经系统原发性损害和功能障碍所激发或引起的疼痛称之为神经病理性疼痛(Neuropathic Pain,NPP)。神经病理性疼痛是一种慢性疼痛,对人们的影响具有长期性和破坏性,并伴随痛觉范围扩大、敏感性增强等特点,但目前对神经病理性疼痛的治疗仍然缺乏有效的方法。因此,对神经病理性疼痛的机制研究显得尤为重要。当机体受到如创伤、感染等刺激时,外周伤害性感受器可将其经外周神经传入背根神经节至脊髓背角,进而交叉上行至大脑皮层,产生疼痛的感觉。在此过程中存在多种电化学信号,如各种炎性介质、神经递质的释放,最终导致中枢敏化,痛阈降低,痛觉敏感。既往对神经病理性疼痛的研究多集中于外周神经系统及中枢神经系统中神经元敏感化、突触重塑等作用,而对胶质细胞活化的研究较少。近年来诸多研究表明,在外周神经损伤模型、外周炎性疼痛模型以及癌痛模型中,脊髓背角胶质细胞均有不同程度的活化[1-3],表明脊髓胶质细胞的活化在神经病理性疼痛中占有至关重要的地位。糖皮质激素是正常人体内的重要生理物质,在机体中发挥广泛作用,包括抗炎、抗休克、抗毒等。糖皮质激素受体GR(Glucocorticoid Receptor)是一种激素依赖性转录调节因子。GR广泛表达于外周神经系统和中枢神经系统中[4-7],并且GR在伤害性信息传递及中枢敏化过程中起着重要作用[8,9],但GR在中枢神经系统中的作用存有争议[10,11]。在外周神经损伤模型中,GR及脊髓小胶质细胞是如何发挥作用的,两者之间是否存在关系,都需要深入研究。本研究通过建立坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型,研究大鼠脊髓背角小胶质细胞的活化状态及GR的表达情况。蛛网膜下腔注射GR的激动剂地塞米松(Dexamethasone、Dex)、GR的拮抗剂RU38486及脊髓小胶质细胞的抑制剂氟代柠檬酸(Fluorocitrate、FC)后,观察大鼠的痛行为变化,并检测脊髓背角小胶质细胞OX42及GR的表达变化,从而探讨外周神经损伤所致神经病理性疼痛的可能发生机制,对其治疗提供理论依据。目的建立SNI大鼠神经病理性疼痛模型,观察SNI大鼠痛行为的变化和脊髓GR蛋白表达水平;通过蛛网膜下腔注射Dex、RU38486,分别激动或抑制糖皮质激素受体GR的表达,检测SNI大鼠痛行为的变化及Western-blot中GR的表达变化,进一步验证GR在神经病理性疼痛中的参与作用。通过免疫荧光双标对SNI大鼠脊髓中GR及小胶质细胞进行定位,并蛛网膜下腔注射小胶质细胞的抑制剂FC,观察SNI大鼠痛行为的变化,并探究神经病理性疼痛中GR与脊髓小胶质细胞的关系。材料和方法1.分组:90只雄性SD大鼠随机分为9组:模型组(SNI组,n=24)和假手术组(Sham组,n=24);SNI+Dex组(n=6)、SNI+NS组(n=6)和SNI+RU38486组(n=6),RU38486组(n=6)和NS组(n=6);SNI+FC组(n=6)和SNI+NS组(n=6)。2.SNI模型的建立:大鼠称重后腹腔注射10%水合氯醛麻醉。切开皮肤后逐层分离,充分暴露坐骨神经及其分支,选择性结扎胫神经和腓总神经,并剪断去除部分神经干。Sham组只暴露不结扎神经分支。3.蛛网膜下腔置管:在L5-L6关节突结合处刺入硬脊膜内,轻夹PE10导管前端将导管向上置入,导管内有清亮的脑脊液流出或出现甩尾、抖动反射,表明蛛网膜下腔置管成功。4.痛行为测定:SNI组和Sham组均在术前1天、术后3、7、14、21天测定50%缩足阈值。SNI+Dex组、SNI+NS组和SNI+RU38486组测定术前1天、术后3、7、9至13天的50%缩足阈值;RU38486组和NS组测定置管前1天、置管后5至10天的50%缩足阈值。SNI+FC组和SNI+NS组于术前1天、术后3、7、9至13天分别测定两组大鼠的50%缩足阈值。5.免疫荧光双标:于术后14天检测SNI组和Sham组脊髓小胶质细胞OX42与糖皮质激素受体GR的表达变化及共表达情况。检测SNI+FC组和SNI+NS组术后13天GR的表达情况。6.Western-blot:检测SNI组和Sham组术后14天及SNI+Dex组、SNI+NS组和SNI+RU38486组术后13天脊髓GR蛋白的表达情况。结果1.与Sham组相比,SNI组大鼠术后50%缩足阈值显著降低(P<0.05);Western-blot显示,SNI组大鼠术后GR的蛋白水平显著降低(P<0.05)。2.蛛网膜下腔注射Dex后SNI大鼠的痛行为得到明显缓解,与SNI+NS组相比,差异有统计学意义(P<0.05);而给予RU38486不会进一步加剧疼痛(P>0.05)。在正常大鼠体内给予RU38486可使50%缩足阈值降低(P<0.05),导致疼痛。与SNI+NS组相比,Western-blot显示:SNI+Dex组大鼠术后GR的蛋白水平显著增高(P<0.05),SNI+RU38486组显著降低(P<0.05)。3.免疫荧光显示,术后SNI组大鼠GR的表达减低,OX42表达增高,与Sham组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);且GR与脊髓小胶质细胞共表达。4.与SNI+NS组相比,SNI+FC组大鼠术后50%缩足阈值显著增加(P<0.05);免疫荧光显示,术后SNI+FC组大鼠OX42表达降低,GR的表达增加,与SNI+NS组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1.糖皮质激素受体激活后可缓解坐骨神经分支选择性损伤大鼠的痛行为,可能在神经病理性疼痛的调控中发挥作用。2.糖皮质激素受体可能由脊髓小胶质细胞参与神经病理性疼痛的调控过程。