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肿瘤干细胞是肿瘤中数量较少但生命力很强的细胞，它抵抗化疗和放疗，不易被定位,还可分化成新的肿瘤细胞,导致癌症复发。因此，杀伤肿瘤干细胞已成为癌症治疗的重点和难点。结肠癌在西方国家占肿瘤死亡率的第二位，我国结肠癌发病人数也呈逐年上升趋势。结肠癌的病变位置隐蔽，早期症状不明显，容易被患者忽略，且预后多复发，复发后多产生耐药。因此，寻找有效的治疗方法十分重要。肿瘤干细胞的发现为结肠癌的治疗开辟了新的道路。甲硫哒嗪是一种吩噻嗪类药物，最早以抗精神分裂作用为人熟知，近年来文献报道，其亦可作为抗肿瘤药物，作为多巴胺受体拮抗剂，抑制D2家族DR受体，阻断DR信号通路，产生抗血癌肿瘤干细胞的作用，具有安全性高，毒副作用小等优点。另有文献报道，甲硫哒嗪通过靶向抑制血癌干细胞、胃癌干细胞及乳腺癌干细胞等多种肿瘤细胞的增殖，诱导凋亡，发挥抗肿瘤的作用，但对于结肠癌干细胞的研究甚少。本研究利用免疫磁珠法从结肠癌肿瘤细胞HCT116中筛选出表面标记为EpCAM+CD44+的结肠癌干细胞，并通过诱导分化、单细胞克隆、细胞免疫化学以及干细胞特异性基因表达的检测等方法进行鉴定。利用CCK8法检测甲硫哒嗪对结肠癌干细胞增殖的影响。通过AO/EB荧光双染法、线粒体膜电位法、Annexin-V-FITC双染法及流式分析等方法评价甲硫哒嗪对结肠癌干细胞的影响。结果显示，筛选所得的EpCAM+CD44+HCT116在无血清培养基中逐渐形成微球，悬浮生长，经含血清培养液诱导后，细胞微球呈现贴壁生长状态。甲硫哒嗪可抑制结肠癌干细胞的增殖，并存在剂量依赖性，在浓度1μmol/L时，有轻微的促进增殖作用。在甲硫哒嗪的作用下，随着浓度的增加，结肠癌干细胞成球能力逐渐下降；AO/EB结果提示甲硫哒嗪的浓度越高，细胞凋亡程度越大；Annexin-V-FITC双染法提示，凋亡早期细胞比例随着甲硫哒嗪浓度的增加也随之增大；JC-1结果显示线粒体膜电位降低，并且甲硫哒嗪的浓度越高，凋亡细胞所占比例越大；Q-PCR检测结果提示促凋亡基因Bax表达上调，抗凋亡基因Bcl-2表达下调；Western Blot结果提示甲硫哒嗪引起的凋亡是通过Caspase途径实现的，且Caspase3的表达随着药物浓度的增加而发生变化。综上所述，甲硫哒嗪可抑制结肠癌干细胞的增殖，诱导结肠癌干细胞凋亡；本研究为靶向作用肿瘤干细胞的药物开发奠定了实验依据，为结肠癌治疗的研究奠定了实验基础。