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黑米在我国有着悠久的种植历史,品种资源丰富,既具有高营养价值又具有显著保健作用,如:可以降低氧化酶的活性;可以降低甘油脂水平,改善高甘油脂脂蛋白的分解代谢;抑制胆固醇吸收,降低低密度脂蛋白胆固醇含量;抗变异、抗肿瘤、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能,在食品、化妆品、医药等领域有着巨大应用潜力。本论文研究了黑米高效液相色谱指纹图谱,并对其化学成分进行提取、分离和结构鉴定,主要研究内容如下:
1、采用反相高效液相色谱法(HPLC),利用三元梯度洗脱模式,研究了不同黑米品种的指纹图谱,通过谱图分析和相对保留时间的计算,确定了共有峰,并计算出各色谱图整体相似度,为比较分析各品种黑米提供了有效的微观信息,同时也为科学评价黑米质量及新品种培育提供了检测方法。
2、研究了常规回流提取、超声波辅助提取以及微波辅助提取三种方法提取黑米化学成分的规律,并分别用正交实验优选得到三种提取方法的最佳条件分别是,回流提取法的最佳提取条件:料液比1:40,回流温度50℃,回流时间4h,乙醇浓度40%;超声波辅助提取法的最佳提取条件:微波功率600W,提取时间0.5h,提取温度50℃,乙醇浓度40%;微波辅助提取法的最佳提取条件:提取时间:1.5h,提取温度60℃,超声功率400W,乙醇浓度40%。
3、用乙酸乙酯和正丁醇对黑米提取物进行萃取分段,并分别用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.5%乙酸水溶液(2:5:2:5)[H-EA-M-0.5%HAc(2:5:2:5)]体系和甲基叔丁基醚:乙酸乙酯:正丁醇:乙腈:(0.001)三氟乙酸(1.5:1.5:1:1:5)[MU-EAEA-B-M-0.001HTr(1.5:1.5:1:1:5)]体系,在高速逆流色谱(HSCCC)上分别从黑米提取物乙酸乙酯部和正丁醇部分离出五个单体成分,经HPLC检测其纯度分别为87.8,86.7,98.9,98.0,和99.9%,应用电喷雾串联质谱(ESI-MSn)技术对高速逆流色谱分离出黑米中的单体成分结构进行了研究,结合参考文献鉴定出其中有一个单体是:矢车菊素-3-葡萄糖苷。
4、研究了黑米中花色苷类物质在乙醇-硫酸铵-水双水相中的分配行为,发现:乙醇和硫酸铵比例增加会使花色苷类物质的的分配系数增大,即花色苷类物质都会更倾向于分配到富含乙醇的上相中;随着温度的升高乙醇先是倾向于向下相转移,到了一定温度后就会逆转为倾向于向上相转移;酸度增强时,花色苷倾向于转移到酸度较强的下层水相中。并在此基础上用乙醇-硫酸铵-水双水相体系分离黑米中的花色苷类物质。