半乳凝素-9对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响及其机制研究

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背景:半乳凝素-9 (galectin-9),是一种起源于T淋巴细胞的具有嗜酸性粒细胞趋化作用的因子,最早在活化的T淋巴细胞中发现,随后在多种正常人体组织中发现galectin-9的存在,具有多种生物学功能如细胞聚集、粘附、增殖、凋亡及炎性调节,并且首次在霍奇金淋巴瘤组织中发现其存在,至今已在多种肿瘤组织如乳腺癌、结肠癌、胃癌等发现galectin-9的表达并在多种不同方面影响肿瘤生物学行为。Galecin-9在胶质瘤中的是否存在及其作用报道少见,我们研究其在胶质瘤中可能的作用。目的:研究外源性半乳凝素-9(galectin-9)对胶质瘤细胞系U251增殖和迁移能力的影响,在galectin-9作用同时观察乳糖的加入对该作用的影响,并探讨其作用机制。方法:利用实时定量PCR方法检测胶质瘤细胞系中galectin-9的表达情况;选取代表性细胞系U251进行下一步实验,在U251细胞培养基中加入不同浓度(1、4、8、16ug/ml)外源性galectin-9蛋白处理一定时间(12、24、36h)后,使用细胞计数试剂盒CCK-8检测胶质瘤细胞增殖能力的变化,使用transwell实验检测胶质瘤细胞迁移能力的变化;另外在galectin-9处理细胞的同时加入其竞争性抑制剂乳糖,再使用同样方法检测增殖和迁移能力,观察乳糖能否影响galectin-9对胶质瘤细胞系的作用。结果:PCR结果显示4种胶质瘤细胞系均极低水平表达galectin-9,其中U251细胞系几乎不表达galectin-9。在增殖试验中,被高浓度galectin-9 (8、16ug/ml)处理组的细胞增殖率较空白对照组明显降低(P<0.001);U251细胞在同一浓度galectin-9处理时,随着时间延长,不同时间点的细胞增殖率逐渐降低(P<0.01);在相同浓度galectin-9处理的基础上,添加乳糖组细胞增殖率相对于未加乳糖组增高(P<0.05)。在迁移试验中,外源性galectin-9刺激U251细胞一定时间后,统计穿至膜下的细胞数较对照组明显减少(P<0.01),在galectin-9处理的同时,添加乳糖组穿至膜下的细胞数较未加乳糖组增多(P<0.05)。结论:外源性半乳凝素-9可明显抑制胶质瘤细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性,同时能够有效抑制胶质瘤细胞迁移能力。Galectin-9对胶质瘤的作用是依赖于乳糖识别区域起作用的,该作用可被抑制剂乳糖抵消。综合galectin-9对胶质瘤细胞系的生物学行为的影响,为治疗胶质瘤提供了新的方向。
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