茶树组织培养技术及遗传转化中抑菌剂选择

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茶树属多年生木本植物,组织培养体系不稳定、重复性较差,且在培养过程中常会出现黄化、畸形等问题;另一方面,茶树离体再生困难、遗传转化效率低,一直是茶树生物技术的难题之一。本文依此展开研究,得到如下结果:(1)5mg/1GA3在茶树组织培养中单独使用,会一定程度地抑制组培苗的生长且具有较高的致畸率,不适合在茶苗增殖培养中添加;若需要添加GA3以促进组培苗伸长生长,可降低其浓度或搭配适宜的生长素。高浓度的NAA(≥0.5mg/1)可促进愈伤组织的诱导和生长,但抑制茶苗生长,在茶苗培养中生长素以0.1mg/1的IBA或低于0.1mg/1NAA为宜。(2)通过不同外植体愈伤和根的诱导和再生实验,发现茎段较叶片更适宜,出愈率和根诱导率均较高;除了带腋芽茎段诱导的愈伤组织能从原腋芽处诱导出茶苗外,其余外植体诱导的愈伤组织均未诱导出芽,故以带腋芽的茎段或以此诱导的整块愈伤组织为转化体更易获得转化苗;以茎尖为外植体获得了大量丛生芽,说明茎尖作为转化体是一种可取的选择。(3)茶苗在继代培养中,一直存在黄化现象,随着继代次数的增加,畸形现象也趋于严重。本实验比较了不同浓度金属离子对茶苗叶色和生长的影响,结果表明,铁盐、Mg2+和Zn2+,尤其是有效元素的缺乏是组培苗黄化的原因之一;采用无激素MS培养基与MS+2mg/16-BA+0.1mg/1NAA培养基交替培养可减轻茶苗畸形现象。(4)在茶树转化体系中抑菌剂对外植体的影响研究比较少,本实验结果显示头孢噻肟钠和羧苄青霉素明显降低茶树外植体的成活率和增殖率,且呈浓度依赖效应;低浓度特美汀(200-300mg/1)对茶树外植体的生长和增殖都没有明显影响,并能完全抑制发根农杆菌的生长,故特美汀在茶树遗传转化中的应用有望提高茶树的遗传转化效率。
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