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α-亚麻酸（Alpha linolenic acid,ALA）是一种人体健康所需的必需ω-3脂肪酸,它具有保护心血管、抗癌、神经保护、抗骨质疏松、抗炎和抗氧化作用等。紫苏籽油含有大量的不饱和脂肪酸,其中α-亚麻酸含量可达60%左右。传统的分离纯化工艺虽然可以得到纯度较高的脂肪酸单品,但是在分离纯化α-亚麻酸时均有一定的缺陷,如分离不完全、收率低、损失大、纯度不高等。逆流色谱具有适用范围广、操作灵活、高效、制备量大、费用低等优点。pH-区带精制逆流色谱相对于普通逆流色谱更适合分离有机酸/碱物质,并且进样量可达普通逆流色谱的10倍以上。本文建立了普通逆流色谱和pH-区带精制逆流色谱两种分离紫苏籽油中α-亚麻酸的方法,为高效分离制备紫苏籽油中的α-亚麻酸提供了新的方法及技术支持。主要研究内容包括:1.紫苏籽油中α-亚麻酸分析方法的建立首先,建立了应用HPLC-DAD法和GC-MS法对紫苏籽油中α-亚麻酸及其他脂肪酸的分析检测方法。HPLC-DAD法无需预处理,可对脂肪酸直接进行检测,重现性好,分析时间较短,快速简便。GC-MS法对不饱和脂肪酸的检测具有色谱峰分离度好,峰容量大,且检测灵敏度高的特点。但GC-MS法存在分析时间较长的缺点,且脂肪酸需要预先甲酯化,步骤较多。HPLC-DAD法可用于对普通逆流色谱和pH-区带精制逆流色谱的备选溶剂体系进行分配系数的测定,同时用于对分离所得馏分的检测及洗脱曲线的绘制。GC-MS法用于对紫苏籽油样品中各组分进行定性和定量,以及对最终结果α-亚麻酸单品的纯度分析。2.普通逆流色谱高效分离制备α-亚麻酸通过对不同体积配比的正庚烷-甲醇-水溶剂体系的筛选,并加入适量的乙酸使溶剂体系呈酸性,最终确定了最优溶剂体系为正庚烷:甲醇:水:乙酸=10:9:1:0.04（v/v）。使用最优溶剂体系进行普通逆流色谱的分离及放大实验,以色谱柱柱体积比为放大比,成倍放大进样量和流动相洗脱流速。应用分析型普通逆流色谱,纯化20 mg紫苏籽油游离脂肪酸并得到了纯度为98.43%的α-亚麻酸9.8 mg;应用半制备型普通逆流色谱,纯化120 mg紫苏籽油游离脂肪酸并得到了纯度为98.32%的α-亚麻酸60.5 mg;应用制备型普通逆流色谱,纯化900 mg紫苏籽油游离脂肪酸并得到了纯度为98.98%的α-亚麻酸466.4 mg。在分离的放大过程中,α-亚麻酸、亚油酸和油酸始终达到基线分离,且在不延长分离时间的前提下,上样量放大了45倍。3.pH-区带精制逆流色谱高效分离制备α-亚麻酸首先在保留酸浓度和洗脱碱浓度CTFA:CNH3.H2O=30 mM:20 mM保持一定的条件下,通过筛选不同体积配比的正己烷:甲醇:水溶剂体系,确定选用正己烷:甲醇:水=10:5:5（v/v）作为基础溶剂体系。在基础溶剂体系上进一步对保留酸浓度和洗脱碱浓度及比例进行优化,最终确定pH-区带精制逆流色谱分离α-亚麻酸的最优溶剂体系为正己烷:甲醇:水=10:5:5（v/v）,保留酸和洗脱碱浓度为CTFA:CNH3.H2O=30 mM:10 mM。在最优溶剂体系下进行α-亚麻酸的分离及放大,应用制备型pH-区带精制逆流色谱,纯化9000 mg紫苏籽油游离脂肪酸并一次性得到了纯度为93.09%的α-亚麻酸4780.2 mg。进一步优化保留酸和洗脱碱浓度后,最终在进样量18000 mg时,一次性分离得到纯度为92.79%的α-亚麻酸9676.7 mg。与制备型普通逆流色谱相比,进样量承载能力进一步提升了20倍,充分体现了pH-区带精制逆流色谱在酸性化合物分离中的独特优势。