颗粒体蛋白前体是颗粒体蛋白基因编码并表达的一种分泌性糖蛋白多肽,分子量约为88kD。颗粒体蛋白是一种分子量为6kD的分泌性蛋白多肽,由颗粒体蛋白前体在水解酶作用下分解而成。目前,研究人员已经分离并提纯出一系列的这些小分子多肽,如从人机体白细胞中获得了人颗粒体蛋白A、B、C、D,从人体尿液蛋白中获得了的人颗粒体蛋白A、B、F。实验研究发现,颗粒体蛋白A大量存在于上皮组织细胞中,对机体组织中的神经、免疫以及肿瘤发生等方面发挥着至关重要的作用。本课题以人颗粒体蛋白A的DNA片段作为基因克隆的模版,构建了引物,然后经过聚合酶链式反应获得大量目的DNA片段,之后利用双酶切法插入到质粒pGAPZαA中,获得重组表达质粒载体——人颗粒体蛋白A-pGAPZαA。将获得的重组质粒利用单酶切法进行线性化处理,然后通过电转化法转入酵母细胞内并与酵母基因组进行融合,实现了人颗粒体蛋白A基因在真核系统中的表达。使用响应面法获得了最佳酵母细胞发酵条件从而提高了重组人颗粒体蛋白A的表达量。使用Ni²⁺构成的MCAC柱进行发酵产物的分离提纯获得高纯度的重组人颗粒体蛋白A。使用MTT法测定重组人颗粒体蛋白A对肿瘤细胞的药理活性。使用4,6-联脒-2-苯基吲哚染色法观察重组人颗粒体蛋白A对肿瘤细胞中的细胞核外观影响。通过FCM技术进一步研究重组人颗粒体蛋白A的抗肿瘤活性。研究结果表明,重组人颗粒体蛋白A对不同种类的人肿瘤细胞的生长分裂表现出抗性,并且最终促使肿瘤细胞发生衰亡。本课题针对人颗粒体蛋白A从其克隆、表达、纯化、发酵优化一直研究到抗肿瘤活性,为颗粒体蛋白抗肿瘤活性药物的研究提供了创新性理论支持。