黄曲霉毒素（Aflatoxin,AFT）是由黄曲霉（A.falvus ）和寄生曲霉（A.parasiticus）在生长繁殖过程中产生的一类强致癌物质,1960年于英国伦敦郊区首次被发现,它破坏人及动物肝脏组织,严重时可导致肝癌甚至死亡,1993年,被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构（IARC）规定为I类致癌物。黄曲霉毒素M₁（Aflatoxin M₁,AFM₁）是哺乳类动物食用了被AFB₁（Aflatoxin B₁,AFB₁）污染的饲料或食品后,在体内经羟基化生成的代谢产物,例如牛、羊等哺乳类动物食用了被AFB₁、污染的饲料,那么在分泌的乳汁中则可检测出AFM₁。AFM₁的毒性虽较AFB₁低一个数量级,但与氰化钾和砒霜比仍属剧毒物质,为强致癌剂,严重危胁人类的健康和安全。2002年,被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构（IARC）规定为I类致癌物。目前,常用的检测方法都不同程度的存在前处理过程繁琐、净化效果差、耗时长等缺点。因此,研制高效分离、准确定量、灵敏、可靠的免疫亲和柱对保障人类及动物食品安全具有重要意义。本研究主要从以下三个方面进行: 1.利用无血清培养基培养分泌抗AFM₁单克隆抗体的杂交瘤细胞,培养至96%以上的细胞死亡后,培养基利用Protein G亲和层析,对分泌的AFM₁单克隆抗体进行纯化,紫外分光光度计测定抗体OD_260nm、OD_280nm值,计算其蛋白浓度为3.533mg/mL;进行SDS-PAGE电泳分析,黄曲霉毒素M₁单克隆抗体纯度良好;间接非竞争ELISA测定其效价为3.2×10⁶,AFM₁单克隆抗体与AFM₁、AFB₁、AFG₁、和DON的交叉反应率分别为100%、15.9%、6.8%和0%,亲和力为6.0×10⁸ L/mol;满足研制免疫亲和柱对抗体亲和力的要求; 2.利用无血清培养基制备的高纯度抗AFM₁单克隆抗体与溴化氰活化的Sepharose 4B进行偶联、封闭、装柱,测得单克隆抗体与活化载体的偶联率为93.4%;建立间接竞争ELISA法（IC-ELISA）和高效液相色谱法（HPLC）,并建立相应的标准曲线,间接竞争ELISA的线性回归方程为y=-9.0249x+96.272（相关系数R² = 0.977）,HPLC法的标准曲线方程为y = 326.08x-122.17（相关系数R² =0.9995）,通过HPLC法优化了AFM₁单克隆抗体免疫亲和柱的使用条件,并对免疫亲和柱的性能进行评价。上样条件:pH 7.2,流速:3mL/min,洗脱条件:90%的甲醇-水溶液,流速:3mL/min。在此优化条件下,免疫亲和柱的柱容量为256ng,可使用次数为3次,如果不能在一天内及时使用免疫亲和柱,则应放在4℃条件下保存,经回收率实验测定,加标量在4～200ng之间时,免疫亲和柱的回收率范围为92.5%～95.6%;样品的加标实验得到AFM₁加标量在0.5～200ng/mL时的回收率为90.7%⁹3.5%,变异系数均小于8%。3.从黑龙江大庆市周边及大型超市随机抽取了30个乳制品样品,用免疫亲和柱-高效液相色谱法与自建的IC-ELISA法进行AFM₁检测,所有被检出含有AFM₁的样品含有AFM₁的浓度均低于0.5ng/mL。