研究背景及目的：　　新生儿窒息（Neonatal asphyxia）是新生儿期最常见的疾病之一。发生窒息后，如果短时间内没有恢复供氧，会导致新生儿死亡。恢复供氧后也可能导致二次损伤，出现一系列生化事件的瀑布，从而影响患儿发育，导致远期神经系统后遗症的发生。后遗症的严重程度取决于窒息的程度，重度窒息与脑性瘫痪、智力低下及癫痫等疾病有关，轻度窒息也与儿童时期出现的注意力缺陷及多动症有关。上述后遗症的出现，给家庭和社会带来沉重的负担。目前对于窒息新生儿的预后判断缺乏生化指标，临床上对于预后的判断通常依赖临床表现、新生儿神经行为评分（Neonatal Behavioral Neurological Assessment，NBNA）和影像学检查，但以上检查手段使用上均具有一定的局限性，临床上需要早期、客观的生化指标来评估窒息新生儿的预后。　　新生儿窒息引起的中枢神经系统损伤主要是因为脑组织缺氧缺血和再灌注损伤。一般认为，窒息后中枢神经系统损伤分为两个阶段：第一阶段涉及到神经元和胶质细胞，能量衰竭引起细胞内外离子失衡、细胞水肿、钙离子损伤；第二阶段发生于生后数小时到数天，仅涉及神经元，称为迟发性神经元死亡(Delayed neuronal death，DND)，目前认为迟发性神经元死亡主要是由于细胞凋亡途径引起的。近年来，对中枢神经系统损伤的生化标志物的研究取得了重大的进展，国内外研究发现凋亡蛋白激酶1（Death Associated Protein Kinases，DAPK1）参与了多种中枢神经系统损伤的病理过程，可能成为中枢神经系统损伤的治疗靶点。　　N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-d-aspartate receptor，NMDA）受体是一种离子型谷氨酸受体，具有极为复杂的分子结构，因为其对于钙离子有较高的通透性使得它在突触的可塑性和兴奋性毒性中起着重要的作用。凋亡相关蛋白激酶(Death Associated Protein Kinases,DAPK)是一类钙离子/钙调素依赖的丝氨酸/苏氨酸激酶家族，DAPK1是 DAPK家族的重要成员，DAPK1主要在不同刺激条件下参与细胞凋亡过程，DAPK1在正常脑组织中保持磷酸化的无活性状态，当局部缺氧缺血损害出现后，被迅速的去磷酸化表现出活性状态，并与NMDA受体的NR2B亚单位的C-末端结合，使得NR2B亚单位的1303位丝氨酸磷酸化，进而激活离子通道 NR1/NR2B受体通道导致大量钙离子内流，诱发细胞凋亡。同时，大量内流的钙离子激活钙调磷酸酶（Calcineurin，CaN），CaN磷酸化DAPK1的pS308导致其活化，引发细胞凋亡的“瀑布式”效应。有动物实验证明窒息大鼠大脑表达DAPK1增加，也有报道脑梗死患者外周血清DAPK1浓度升高，且将外周血清 DAPK1浓度作为脑梗死溶栓治疗疗效的评估手段。但国内至今无DAPK1与新生儿窒息相关的报道。新生儿窒息引起血脑屏障受损，中枢神经系统产生大量的DAPK1进入脑脊液及血液中，其浓度的高低可以反映中枢神经系统损伤的程度和预后。　　本实验通过研究新生儿窒息患者外周血清DAPK1浓度与新生儿二十项神经行为评分（NBNA）及头颅磁共振扫描（MRI）之间的相关性，探讨外周血清D APK1与新生儿窒息的关系及其在窒息后脑损伤预后的早期评估中的临床应用价值。　　材料和方法：　　1．材料　　研究对象：收集广东省妇幼保健院新生儿病房收治（含本院出生及转运）的足月新生儿窒息病例46例，按Apgar评分分为轻度窒息组和重度窒息组，其中重度窒息组22例，轻度窒息组24例。另随机抽取同时期广东省妇幼保健院产科出生的足月无窒息新生儿27例作为对照。排除母亲诊断为妊娠糖尿病、高血压等妊娠合并症及新生儿早产、畸形、遗传代谢性疾病、核黄疸等异常的因素。　　2.实验方法　　2.1外周血清DAPK1浓度的测定：所有入组新生儿抽取生后第1天、第3天及第5天静脉血各2ml，标本均不进行抗凝剂抗凝处理，室温放置2h后1000x g离心15分钟取上清，保留血清600μl分置于Eppendorf管中，在-80℃冰箱保存待检，溶血标本剔除。采用美国R&D公司生产的酶联免疫试剂盒，汇松科技生产的MB530型酶标仪，酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血清DAPK1浓度。　　2.2新生儿神经行为评分：所有入组新生儿于生后7天内行新生儿二十项神经行为评分（NBNA）评估。在半暗光线下及安静的环境中进行，将患儿单独放置在上述环境中安静30分钟后测试，由两次进食中间睡眠状态时开始，室温控制在24-28℃之间，全部项目的检查于10分钟内完成，采用鲍氏二十项神经行为评分，满分为40分，35分以下（含35分）判定为预后不良。　　2.3头颅核磁共振扫描：对46例窒息新生儿在生后2周内进行头颅核磁共振扫描。所有患儿均经家属同意并签署知情同意书，使用美国通用公司（GE）光纤1.5T磁共振仪OpTixMR完成头颅核磁共振扫描。头颅磁共振扫描前20-30分钟内给予10％的水合氯醛0.5-1.0ml/kg灌肠或苯巴比妥5mg/kg肌肉注射，常规做轴位T1WI，T2WI，DWI和SWI像，矢状位T1WI像。　　2.4统计学处理：应用SPSS17.0统计软件进行结果分析，计量资料以平均数±标准差（x±s）表示，两组间的比较采用t检验，采用Spearman线性相关分析对变量间的相关性进行分析。以P＜0.05为差异具有统计学意义。　　结果：　　1．外周血清DAPK1浓度　　生后第3天，重度窒息组患儿外周血清DAPK1浓度显著高于轻度窒息组及对照组（248.98±31.65，161.36±25.61，79.92±11.01，P值均＜0.01），轻度窒息组外周血清DAPK1浓度显著高于对照组（161.36±25.61，79.92±11.01，P＜0.01）；重度窒息组生后第5天外周血清DAPK1浓度显著高于生后第3天（278.35±41.23，248.98±31.65，P＜0.01），轻度窒息组生后第5天外周血清DAPK1浓度显著低于生后第3天（127.46±21.19，161.36±25.61，P＜0.01）；各组在生后第1天外周血清DAPK1浓度无统计学差异(75.41±10.64，77.07±10.98，80.01±8.65，P值均＞0.05)；对照组在生后第1天、第3天、第5天外周血清DAPK1浓度无统计学差异(75.41±10.64，79.92±11.01，72.98±13.24，P值均＞0.05)。　　2．外周血清DAPK1浓度与NBNA评分之间的关系　　窒息组NBNA评分显著低于对照组（34.57±1.34，37.93±1.07，P＜0.01），窒息组外周血清DAPK1浓度与NBNA评分呈负相关（r=-0.61，P＜0.01）。NBNA评分低于35分的患儿生后第3天外周血清DAPK1浓度显著高于NBNA评分高于35分的新生儿（228.72±28.34,166.61±23.24，P＜0.01）。　　3．外周血清DAPK1浓度与头颅核磁共振扫描结果之间的关系　　46例窒息新生儿生后2周内头颅MRI病灶检出率为69.6%，头颅MRI异常组外周血清DAPK1浓度显著高于MRI正常组（t=3.96，P＜0.01）。　　结论：　　1．外周血清 DAPK1水平与新生儿窒息的程度有相关性并且与窒息程度呈正相关。　　2.外周血清DAPK1水平与窒息新生儿NBNA评分呈负相关。　　3.外周血清 DAPK1水平与窒息新生儿头颅 MRI扫描结果有相关性，提示DAPK1是新生儿窒息后判断中枢神经系统损伤有价值的生化标志物。　　4．外周血清 DAPK1浓度可以作为一项早期、特异性的生化标志物对新生儿窒息中枢神经系统损伤的预后进行评估，具有一定的临床应用价值。