抗部分植物病原真菌放线菌的筛选及其活性代谢产物的研究

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放线菌能够产出抗生素、酶及其抑制剂等多类生物活性物质,且由放线菌产出的生物活性物质数量十分的惊人,目前生物界中发现的两万多种生物活性物质中,约有70%都是由放线菌产出的,可以说放线菌存在着极为可观的经济价值。土壤是放线菌最富集的地方,因而对土壤中放线菌的开发具有十分重要的意义。本研究的研究目的在于从土壤中分离出对多类植物病原真菌有着强烈拮抗作用的放线菌株,并对菌株进行分析、鉴定,有效地分离其中的抑菌活性物质,为农用抗生素提供新型的产生菌来源,实验的具体研究内容如下:(1)放线菌的分离:对来自长春市、哈尔滨市、东宁市、萝北县、鸡西煤矿、名山岛、太平沟大峡谷的七种土样进行预处理,菌株分离时选用的培养基为腐殖酸培养基和LSV-SE琼脂培养基,并向培养基中加入20mg/L萘啶酮酸和50mg/L放线菌酮以达到分离菌株的目的,分离后可得到放线菌共67株。(2)高活性菌株的筛选:测定67株放线菌的发酵液对细菌的抑菌活性时采用的是管碟法,测定结果显示有14株放线菌对藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径≥15mm,其中抑菌圈直径达到20mm以上的放线菌有H2、H10、Z2和M2。(3)放线菌的分类研究:H2、H10、Z2、M2这4株放线菌株的分类研究结果表明其生理生化特征、培养特征、形态特征均与链霉菌属一致;在对Z2菌株的16sDNA进行测序后进行Blast比对,发现Z2号菌株与链霉菌Streptomyces yatensis101000T可达到99%的相似性。(4)发酵粗提物对真菌的抑制研究:取对细菌有较好抑菌活性的14株放线菌经过发酵后的粗提物,对其进行6种致病菌的抑制真菌活性研究,研究结果表明,这14株菌的发酵粗提物都至少对1种真菌有抑菌作用,其中对3种以上真菌都具有抑制作用的菌株有7株,分别为H2、H10、Z2、M2、M3、T6和T8,而H2、H10、Z2和M2菌株对7种真菌都存在抑菌作用,其中H10对5种治病真菌的抑制率在50%以上,Z2对6种致病真菌的抑制率都在50%以上。(5)发酵粗提物的分离:对具有抑菌活性的4株放线菌的发酵粗提物进行分离、纯化及结构鉴定,鉴定结果显示,这四株菌中都存在着同一种化合物——阿扎霉素B。(6)化合物的活性验证:对化合物阿扎霉素B进行抑真菌活性测定,测定结果表明:化合物阿扎霉素B在浓度为100μg/mL时,对6种致病真菌都存在抑制活性。
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