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目的:炎症性肺病以肺内大量炎症细胞浸润,炎症介质释放,进而引起促炎/抗炎系统失衡为特征的肺脏疾病。长期以来糖皮质激素(glucocorticoids,GC)作为抗炎药用于炎症性肺病的治疗,但其个体疗效存在差异,其信号转导机制尚未明了。肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)是主要炎症细胞之一,在炎症性肺病发生发展过程中起重要作用。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性杆菌产生的内毒素的主要活性成分,能够刺激机体免疫细胞产生炎症介质,促进炎症性肺病的发展。信号转导转录激活子-3(Signal transducers and activators of transcription-3,STAT3)的激活可以抑制炎症细胞因子的产生。本实验以小鼠AM为研究对象,观察地塞米松(dexamethasone, DEX)对LPS刺激的上述细胞分泌TNF-α、IL-10的影响,初步探讨STAT3在地塞米松对小鼠AM分泌TNF-α及IL-10影响中的作用,为临床应用糖皮质激素治疗炎症性肺病提供理论基础。方法:1. ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α的浓度。培养MH-S细胞株,调节细胞浓度为5×106/ml,随机分组:①对照组:加入与实验组同体积的无血清RPMI1640培养液;②LPS组:终浓度为100ng/ml的LPS刺激2h、6h、12h;③DEX10-6mol/L +LPS组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX孵育后2h用LPS刺激2h、6h、12h;④DEX10-8mol/L +LPS组:终浓度为1×10-8mol/L的DEX孵育后2h用LPS刺激2h、6h、12h;⑤DEX10-6mol/L组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX刺激2h、6h、12h;⑥DEX10-8mol/L组:加入终浓度为1×10-8mol/L的DEX刺激2h、6h、12h。各组刺激成功后取细胞上清液,用ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α的含量。2. ELISA试剂盒检测细胞细胞上清液中IL-10的浓度。方法及分组同TNF-α测定。3.免疫细胞化学法检测MH-S细胞中p-STAT3的表达。将MH-S细胞于培养板中进行爬片,调节细胞浓度为5×106/ml,随机分组:①对照组:加入与实验组同体积的无血清RPMI1640培养液;②LPS组:终浓度为100ng/ml的LPS分别刺激30min、2h、4h;③DEX+LPS组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX孵育2h后,用LPS分别刺激30min、2h、4h;④DEX组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX分别刺激30min、2h、4h。各组细胞刺激成功后,用免疫细胞化学法检测各组MH-S细胞中STAT3表达的变化。数据以均数±标准差( )表示,各组比较用单因素方差分析(One way ANOVA),有显著性进一步用Student-Newman-Keuls(SNK-q)检验,P<0.05表示有统计学意义。结果:1.细胞上清液中TNF-α含量的变化: LPS刺激2h(164.29±0.44)pg/ml、6h(532.90±0.99)pg/ml、12h(350.78±10.29)pg/ml均明显高于对照组(30.81±3.81)pg/ml (P<0.05)。DEX10﹣6 mol/L +LPS2h(135.07±1.08)pg/ml、DEX10﹣6 mol/L +LPS6h(397.65±0.49)pg/ml、DEX10﹣6 mol/L +LPS12h(351.20±1.56)pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS2h(162.05±0.35)pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS6h(468.86±1.36)pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS12h(304.92±0.26)pg/ml均明显高于对照组(P<0.05);DEX10﹣6 mol/L +LPS6h组、DEX10﹣8mol/L+LPS6h组较LPS6h组明显降低(P<0.05),且具有剂量依赖性;DEX10﹣6 mol/L +LPS2h组低于LPS2h组(P<0.05),而DEX10﹣8 mol/L +LPS2h组较LPS2h组无明显变化(P>0.05);DEX10﹣8 mol/L +LPS12h组低于LPS12h组(P<0.05),而DEX10﹣6 mol/L +LPS12h组较LPS12h组无明显变化(P>0.05)。2.细胞上清液中IL-10含量的变化:对照组(23.21±0.35)pg/ml。LPS刺激2(h24.89±0.24)pg/ml较对照组无明显变化(P>0.05), 6h(33.32±0.30)pg/ml、12h(44.93±0.99)pg/ml均高于对照组(P<0.05),DEX预处理后,DEX10﹣6 mol/L +LPS2h(31.05±0.54)pg/ml、DEX10﹣6 mol/L +LPS6h(60.00±0.33)pg/ml、DEX10﹣6 mol/L +LPS12h(85.00±0.64)pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS2h(27.74±0.46)pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS6h(54.23±0.64)pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS12h(78.05±0.30)pg/ml均高于对照组和LPS组(P<0.05),其具有剂量依赖性。DEX10﹣6 mol/L2h(26.85±0.24)pg/ml、DEX10﹣6 mol/L6h(50.64±0.08)pg/ml、DEX10﹣6 mol/L12h(76.22±0.95)pg/ml、DEX10﹣8 mol/L6h(45.93±0.76)pg/ml、DEX10﹣8 mol/L12h(66.09±1.48)pg/ml均高于对照组和LPS组(P<0.05),DEX10﹣8 mol/L2h(24.93±1.46)pg/ml较对照组和LPS2h组无明显变化(P>0.05)。3.免疫细胞化学结果表明:对照组几乎无黄染;LPS刺激30min时细胞开始出现黄染,其光密度值为(0.17±0.001);LPS刺激2h时细胞黄染最强(0.22±0.007);LPS刺激4h时细胞黄染开始减弱(0.20±0.005);用DEX预处理后,LPS刺激引起的细胞黄染进一步增强,DEX+LPS30min组(0.25±0.004),DEX+LPS2h组(0.34±0.011), DEX+LPS4h组光密度值为(0.34±0.013)。经单因素方差分析,各组与对照组(0.12±0.013)比较p-STAT3表达均显著增高(P<0.05);与LPS组比较,DEX+LPS组p-STAT3表达显著增高(P<0.05)。结论:1.LPS刺激MH-S细胞后,可引起细胞上清液中的TNF-α和IL-10分泌增加,用DEX干预后,可抑制TNF-α分泌,而促进IL-10分泌,并具有剂量依赖性。2. LPS刺激MH-S细胞后,可引起p-STAT3表达增加,而DEX能够使p-STAT3表达更加明显,这提示DEX可能通过p-STAT3的介导,进而抑制TNF-α而促进IL-10的分泌。