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研究目的：本课题旨在建立一种功能化磁性纳米四氧化三铁颗粒(Fe<,3>O<,4>-MNPs)携载阿霉素(ADM)以及Fe<,3>O<,4>-MNPs共聚合ADM和汉防己甲素(Tet)的药物制备方法，考察聚合温度、聚合时间、药球比对载药的影响；研究携载ADM的Fe<,3>O<,4>-MNPs(Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM)以及共聚合ADM和Tet的Fe<,3>O<,4>-NPs(Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM-Tet)对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02的作用，在蛋白质和基因水平初步探讨应用Fe<,3>O<,4>-MNPs和Tet协同逆转K562/A02细胞对阿霉素耐药的机理。开发新型耐药逆转剂，为临床治疗提供新策略和理论基础。
研究方法：(1)采用机械吸附聚合法在4℃、37℃下以不同浓度Fe<,3>O<,4>-MNPs(V/V：0.05， 0.1，0.2，0.4)和一定浓度的ADM(50 μmol/l)(不同药球比)以及不同浓度Fe<,3>O<,4>-MNPs(V/V：0.05， 0.1，0.2，0.4)和一定浓度的ADM(50 μmol/l)、Tet(10 μmol/l) (不同药球比)分别聚合24h、48h。(2)溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)法检测两种细胞分别与在不同聚合温度、聚合时间、药球比条件下的的聚合物Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM以及Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM-Tet孵育48小时后的生存率，计算细胞抑制率。(3)荧光显微镜检测各实验组K562/A02细胞内ADM浓度。 (4)应用流式细胞仪测定各实验组K562/A02细胞细胞膜上P-gp数量的表达。(5)采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测各实验组K562/A02细胞细胞多药耐药基因(mdrl基因)mRNA表达水平。
结果：(1)随着Fe<,3>O<,4>-MNPs浓度增加，Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM以及Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM-Tet对两种细胞K562和K562/A02的细胞抑制率均提高，聚合在4℃、48h时的细胞抑制率分别高于37℃、24h。①对于K562细胞：随着Fe<,3>O<,4>-MNPs浓度的增加，Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM以及Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM-Tet对K562细胞抑制率均逐渐增强，呈直线相关；聚合条件在4℃，24h的细胞抑制率强于37℃，24h的细胞抑制率。②对于K562/A02细胞：随着Fe<,3>O<,4>-MNPs浓度的增加，细胞抑制率增强但不呈直线相关；聚合条件在37℃，48h的细胞抑制率强于37℃，24h的细胞抑制率；在37℃，24h聚合条件下通过荧光显微镜所测得的细胞内ADM荧光强度值增强，不呈直线相关。(2)随着Fe<,3>O<,4>-MNPs浓度增加，Fe<,3>O<,4>-MNPs携载ADM以及Fe<,3>O<,4>-MNPs共聚合ADM和Tet与K562/A02的作用后，细胞内ADM的荧光强度增加，但其之间不成线性关系与MTT法所反映的细胞存活率的变化一致。(3)Tet能够降低K562/A02细胞膜P-gp表达，下调mdrl mRNA水平。(4)携载Tet的Fe<,3>O<,4>-MNPs能够增强这种基因的下调，具有协同作用。但是不能降低P-gp表达的数量。结论：(1)可通过机械吸附法携载水溶性药物ADM、共聚合ADM和Tet两药，聚合过程具有显著的温度、时间依赖特性。(2)单独携载ADM或Tet以及共聚合两药的Fe<,3>O<,4>-MNPs均能够通过增加药物在多药耐药细胞K562/A02中的有效浓度增加化疗效果，载药纳米复合物有逆转多药耐药作用。 (3)携载Tet的Fe<,3>O<,4>-MNPs能够通过增加多药耐药细胞内的Tet浓度明显下调mdr1 mRNA水平逆转多药耐药。(4)功能化Fe<,3>O<,4>-MNPs和Tet在逆转K562/A02细胞对ADM耐药性中发挥协同作用。