论文部分内容阅读
目的:阐明小鼠PTA1(mPTA1)/mCD226对杀伤性T淋巴细胞(CTL)分化的影响。确定mPTA1分子与mTage4参与相互作用的结构域,以深入研究这两种分子的功能。 方法:①利用小鼠PTA1-hIgFc真核表达载体表达并纯化mPTA1融合蛋白,免疫家兔,获得抗mPTA1多克隆抗体,并用偶联mPTA1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化多克隆抗体。间接免疫荧光染色及流式细胞术鉴定多克隆抗体的特异性。②通过混合淋巴细胞培养(MLC)诱导产生CTL效应细胞,以51Cr释放实验检测mPTA1多克隆抗体在MLC中对T淋巴细胞分化及杀伤功能的影响。③扩增编码mTage4全长分子和mPTA1、hICAM-1分子不同结构域的DNA序列,构建含mTage4和mPTA1不同结构域编码序列的截短体以及mPTA1/hICAM-1荧光蛋白嵌合体分子基因的真核表达载体,并转染COS-7真核细胞,通过激光扫描共聚焦显微镜研究这两种分子间的相互作用。 结果:①获得了mPTA1-hIgFc融合蛋白和针对mPTA1胞膜外区的多克隆抗体,该抗体能与转染细胞表面mPTA1分子结合。②mPTA1多克隆抗体对MLC诱导的CTL的杀伤有明显的抑制作用,并呈剂量依赖关系,mPTA1多抗加入的时间愈早,抑制杀伤作用的效果愈明显。③DNA序列测定证实