论文部分内容阅读
目的：检测乙型肝炎后肝硬化患者外周血单核细胞HLA-DR和TLR4表达特点及其与临床特征、预后的关系，并初步探讨其改变和发生机制；通过随访研究了解预防性应用口服抗生素对单核细胞表型、亚群和HLA-DR及TLR4表达的影响，为我们进一步了解肝炎后肝硬化形成机制及肝硬化患者预防性应用抗生素的意义提供理论依据。方法：1外周血单核细胞表型的检测：随机选择HBV所致的肝硬化患者54例，按Child-Pugh分为A级、B级、C级，12例健康人作为对照组。采用三色荧光全血染色法，用荧光素标记的抗CD14、抗CD16、抗HLA-DR、抗TLR4mAb进行免疫荧光染色，应用流式细胞仪检测。2血浆中LPS水平的检测：采用鲎试剂盒检测肝硬化患者及正常人血浆中的LPS水平。3研究对象血浆标本取自白求恩国际和平医院54例乙型肝炎病毒感染的住院患者和12例性别、年龄相匹配的健康志愿者。临床指标如ALT、AST、TBIL、ALB等用全自动生化仪检测。患者的一般情况见表1。所有患者在过去6个月内未接受过抗病毒药物或类固醇类药物治疗。本研究符合世界医学协会赫尔辛基宣言要求，并且获得中国科学院生物研究所和白求恩国际和平医院伦理委员会批准。所有患者均已签署知情同意书。结果：1乙型肝炎后肝硬化患者外周血单核细胞频率、表型及HLA-DR、TLR4的表达特点及与临床指标的关系1.1肝硬化患者外周血单核细胞的频率表达特点：健康对照组、肝硬化Child A级、Child B级、Child C级外周血中单核细胞的频率分别为(6.78±2.47)%、(9.08±3.45)%、(12.93±2.05)%、(16.51±6.01)%，组间比较均有统计学意义(P<0.05)。肝硬化Child A级和B级单核细胞频率与临床指标无明显相关性(P>0.05)。肝硬化Child C级单核细胞频率与AST和TBIL均呈显著正相关(P<0.05)。1.2肝硬化患者外周血CD16~+单核细胞的频率表达特点：健康对照组、肝硬化Child A级、Child B级、Child C级外周血中CD16~+单核细胞的频率分别为(10.13±4.69)%、(12.63±5.07)%、(16.08±5.47)%、(23.86±8.11)%。其中，肝硬化Child A级、Child B级、Child C级三组组间比较均有统计学意义(P<0.05)，肝硬化Child B级、Child C级和健康对照组组间比较有统计学意义(P<0.05)。肝硬化Child A级患者CD16~+单核细胞频率与ALT和AST呈正相关(P<0.05)，肝硬化Child B级和Child C级患者CD16~+单核细胞频率与临床指标无明显相关性(P>0.05)。1.3肝硬化患者外周血单核细胞HLA-DR的表达频率特点：健康对照组、肝硬化ChildA级、Child B级、Child C级外周血中单核细胞HLA-DR的表达频率分别为(84.35±6.86)%、(88.90±6.24)%、(85.47±7.54)%、(66.38±13.43)%。其中，肝硬化Child A、Child B和健康对照组三组组间比较均无统计学意义(P>0.05)，肝硬化Child C级单核细胞HLA-DR表达频率与健康对照组、ChildA、Child B三组的组间比较均有统计学意义(P<0.05)。肝硬化患者三组均与ALT、AST、TBIL无相关性(P>0.05)，Child A级患者HLA-DR与ALB呈显著负相关(P<0.05)，而Child C级HLA-DR与ALB呈正相关(P<0.05)。1.4肝硬化患者外周血单核细胞TLR4平均荧光强度的表达特点：健康对照组、肝硬化ChildA级、Child B级、Child C级外周血中单核细胞TLR4平均荧光强度的表达分别为(6.03±1.85)、(5.55±2.13)、(4.01±2.18)、(2.92±1.69)。其中，肝硬化Child B级和Child C级与Child A级、健康对照组组间比较有统计学意义(P<0.05)。各组肝硬化患者单核细胞TLR4平均荧光强度的表达与临床指标均无相关性(P>0.05)。2肝硬化患者血浆中内毒素的水平及与单核细胞HLA-DR和TLR4表达的关系健康对照组、肝硬化Child A级、Child B级、Child C级患者的血浆内毒素水平分别为(3.70±2.15)pg/ml、(65.15±65.10)pg/ml、(143.37±149.16)pg/ml、(403.54±347.11)pg/ml，组间比较均有统计学意义(P<0.05)。肝硬化Child A、Child C级患者的血浆内毒素水平与单核细胞HLA-DR、TLR4表达均无明显相关性(P>0.05)，肝硬化Child B级患者的血浆内毒素水平与单核细胞HLA-DR表达无明显相关性(P>0.05)，与TLR4呈显著负相关(P<0.05)。3抗生素治疗前后肝硬化患者外周血单核细胞频率、表型及HLA-DR、TLR4的表达变化3.1抗生素治疗前后肝硬化Child B级外周血单核细胞频率分别为(12.49±1.56)%、(11.69±2.14)%，Child C级分别为(12.56±2.25)%、(13.01±1.52)%。其中，肝硬化Child B级和Child C级治疗前后比较均无统计学意义(P>0.05)。3.2抗生素治疗前后肝硬化Child B级外周血CD16~+单核细胞频率分别为(14.76±5.61)%、(12.81±3.76)%，Child C级分别为(18.58±6.50)%、(16.02±3.61)%。其中，肝硬化Child B级患者治疗前后CD16~+单核细胞比较有统计学意义(P<0.05)，Child C级治疗前后比较无统计学意义(P>0.05)。3.3抗生素治疗前后肝硬化Child B级外周血单核细胞HLA-DR表达频率分别为(85.78±7.19)%、(86.37±5.25)%，Child C级分别为(71.59±14.10)%、(78.40±11.27)%。其中，肝硬化Child B级患者治疗前后单核细胞HLA-DR表达频率比较无统计学意义(P>0.05)，Child C级患者治疗前后比较有统计学意义(P<0.05)。3.4抗生素治疗前后肝硬化Child B级外周血单核细胞TLR4平均荧光强度分别为(3.61±1.72)、(4.03±1.68)，Child C级分别为(4.66±1.48)、(4.93±1.03)。其中，肝硬化Child B级患者治疗前后单核细胞TLR4平均荧光强度比较有统计学意义(P<0.05)，Child C级治疗前后比较无统计学意义(P>0.05)。结论：1乙型肝炎后肝硬化患者外周血单核细胞及CD16~+单核细胞亚群频率增加，HLA-DR在疾病早期呈上升趋势，晚期则明显下降，TLR4表达随病情进展持续性下降，其变化与病情严重程度和预后相关，动态监测对肝硬化的病情和预后评价具有重要意义。2口服抗生素治疗后通过降低体内内毒素水平能降低CD16~+单核细胞频率、上调单核细胞TLR4和HLA-DR表达，在一定程度上调节单核细胞功能，并可能改善肝硬化患者的预后。