背景：与胚胎干细胞相比(ES细胞)成体组织特异性祖细胞的具有局限性的自我更新和多向分化能力，但不具有癌变的特性。因此，成体干细胞在细胞治疗方面具有广阔的临床应用前景。然而，目前由于干细胞的起源以及标志物的局限性等原因其研究仍处于初级阶段。被认为神经干细胞标志物Nestin在胚胎干细胞向多种祖细胞分化过程中均表达，且在成体的肝脏，心脏，胰腺，骨骼肌，胃肠道，皮肤，睾丸，肾等组织中也有表达。提示Nestin可能是多祖干细胞的共同标志物。　　目的：拟在本研究中主要探讨Nestin在出生后小鼠成体各组织中的分布与表达特性，以及利用Nestin-GFP转基因小鼠通过流式分选Nestin阳性细胞，验证其自我更新能力和多向分化潜能，并分析移植到体内后其分化能力和对损伤组织修复的影响。　　方法：选取不同年龄段Nestin-GFP小鼠取各组织进行切片，观察Nestin-GFP表达情况，并通过免疫双标对表达Nestin的细胞定位。利用流式分选方法从睾丸和肾组织分选出Nestin阳性细胞，体外培养，扩增，进行分化实验。建立睾丸间质损伤动物模型和肾损伤模型，并将细胞移植到体内观察其分化特性和功能。结果：1)通过Nestin-GFP转基因小鼠，我们发现Nestin在小鼠出生后第一天在眼球视网膜，毛囊，心，脂肪，肾，睾丸，气管，骨髓等组织中有表达。2)其中重点观察了不同年龄段的眼，心，肾，睾丸等组织中Nestin表达情况，发现随着发育成熟Nestin的表达也逐渐减弱。在睾丸中Nestin阳性细胞主要表达于睾丸间质部位，并且与睾丸间干细胞相关标志物PDGF-α，C-kit，LIF-R等共表达。肾组织中Nestin主要表达在肾小球和肾间质细胞，并与足细胞特异性标志物肾病蛋白(Nephrin)，波形蛋白(Vimentin)共表达。3)通过流式分选技术分离Nestin-GFP小鼠睾丸中Nestin阳性细胞，发现分离得到的细胞培养过程中保存Nestin表达，可以传代，细胞核型正常，具有增殖能力。另外，可分化为神经类细胞，表达Tuj-1和GFAP；在不同分化条件中分化成脂肪细胞，骨细胞，肌肉细胞，软骨细胞分化，此外可分化为睾丸间质细胞，表明具有多向分化能力。在EDS诱导的睾丸间质缺乏小鼠和大鼠中移植分离培养的细胞后发现，移植细胞可分化为睾丸间质细胞，并且明显提高了血中睾酮水平。4)从Nestin-GFP肾中分离得到的Nestin阳性细胞，在体外培养发现具有明显的自我更新、增殖能力，可以成功传代到30代，核型正常。在应用无血清培养基条件下，这群细胞形成球样克隆，能够共表达Nestin与Nephrin、Vimentin、SSEA1和SSEA4等足细胞及干细胞相关标志物，并且具有增殖能力。除此之外，在不同的培养条件下可以诱导分化成神经细胞，成骨细胞，成脂肪细胞，显示多向分化潜能。尤其是分离培养扩增的细胞静脉注射到肾缺血损伤模型小鼠体内后，发现移植的细胞有效地迁移至肾组织中，并且主要分布在肾小球中，极少数细胞见于肾间质部分。还检测到细胞可特异性分化为Nephrin或Vimentin阳性细胞，降低血肌酐水平，减少损伤引起的细胞凋亡，改善肾功能恢复。　　结论：以上结果揭示了睾丸和肾中Nestin阳性细胞具有自我更新能力和分化能力，可能是其组织干细胞的重要标志。提示Nestin可能是胚胎发育过程中遗留下来的成体多祖干细胞的共同标志物。为今后在不同器官研究干细胞奠定了良好的科学依据，同时也为今后研究干细胞相关机制提供了重要的理论依据，为临床进一步应用干细胞治疗疾病迈出了新的一步。