小麦全蚀病菌候选效应子的筛选和鉴定

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小麦是全球范围内广泛种植的粮食作物。近年来,小麦全蚀病在全国范围内发生的趋势和范围每年都在上升,我国对小麦全蚀病也越来越重视。小麦全蚀病是由子囊菌门禾顶囊壳小麦变种(Gaeumannomyces tritici)引起的一种小麦根部土传病害,在近基部及根部形成黑褐色病斑,病菌可以侵入小麦维管束,并大量繁殖,严重影响植株水分及营养物质的运输。病株常表现为矮小,枯黄,进而呈现典型的“白穗”、“黑脚”症状,一旦发病会严重影响小麦产量。研究表明,病原真菌为了成功的侵染寄主,会分泌大量效应子。因而开展小麦全蚀病菌效应子基因的克隆及功能解析,将有助于探索小麦全蚀病菌分子致病机理。目前,对小麦全蚀病菌效应子的研究甚少。本文基于实验室前期对小麦全蚀病菌候选效应子生物信息学分析结果,首先,对其中的51个候选效应子进行克隆;其次,运用农杆菌渗入法,在本氏烟上进行诱导和抑制过敏性坏死反应候选效应子的筛选;最后,利用聚乙二醇(PEG)介导的原生质体遗传转化法,对筛选得到的诱导和抑制过敏性坏死反应的候选效应子进行基因敲除,对其功能进行初步分析。结果显示:1)成功构建了51个候选效应子的植物表达载体;2)对51个候选效应子进行诱导本氏烟过敏性坏死反应筛选,获得了5个候选效应子,即Gex1、Gex5、Gex10、Gex12、Gex15;3)对51个候选效应子中23个候选效应子进行抑制Bax引发的细胞凋亡筛选,没有一个效应子可以抑制Bax引发的细胞凋亡;4)针对获得的5个候选效应子进行基因敲除,成功构建了其中4个候选效应子基因敲除融合片段,即Gex1、Gex5、Gex10、Gex15;5)原生质体遗传转化后,鉴定得到了2个候选效应子基因敲除转化子,即Gex1、Gex5;6)Gex1、Gex5基因敲除突变体在菌落形态上与野生型菌株相比,具有一定的差异。本文为后续进一步功能验证奠定了研究基础。
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