前言 慢性糖尿病和脑缺血再灌注损伤是引起认知障碍两个主要危险因素。海马在人和动物学习、记忆整合中起重要作用，认知障碍与海马区神经元变性、坏死、缺失有密切关系。慢性糖尿病和脑缺血再灌注损伤均出现了海马神经元凋亡，出现认识障碍症状。有许多毒性物质参与了此损伤，有报道说，Caspase-3是凋亡级联反应的关键蛋白酶，参与了慢性糖尿病和脑缺血再灌注海马神经元损伤病理过程。其次，Aβ参与了慢性糖尿病和脑缺血再灌注海马神经元损伤的病理过程。本研究采用STZ诱导慢性糖尿病和线栓法建立了慢性糖尿病MCAO模型，用免疫组化方法和HE法观察海马神经元缺失、Caspase-3、Aβ在慢性糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马神经元损伤中的表达，本研究想要进一步探讨Caspase-3和Aβ与慢性糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制的关系，为临床防治提供理论基础。 材料与方法 全部实验动物70只，2-3月体重100～130g（由中国医科大学实验动物中心提供），随机分为4组：①正常对照组（n=5）；②假手术组（n=5）；③缺血再灌注组（n=5）；④慢性糖尿病脑缺血再灌注组（简称DM组）（n=5）；③～④组分别对应有1d、2d、3d、4d、5d、7d等时间点，每个时间点n=5。慢性糖尿病模型建立：于大鼠左下腹腔内注射STZ(链脲佐菌素，55mg·Kg^-1，Sigma)。空腹血糖＞16.7mol·L^-1的大鼠判定为糖尿病大鼠，饲养40天。脑缺血再灌注模型的建立：参照 onga报道的线栓法建立大鼠 MCA闭图再灌注模型，缺血Zh后再灌注id上Jd／d3、7d。在不同时间点，大鼠在 10％水含氯醛门．3g·kgJ)腹腔麻醉下左心室插管，4％多聚甲醛灌流取脑，固定，浸蜡、包埋，连续切片，分别进行HE和CasPase一3人＊免疫组化染色（SABC法、DAB显色）。光镜下半定量计数100卜m长度内的海马CAI区结构完整的正常锥体细胞数人aspaseJ人p免疫组化阳性细胞数，计算其平均值上标准差k。S人对同一时间点，＊M组和缺血再灌注组分别比较，进行t检验。 结 果 HE染色和Caspase一人仁免疫组化染色结果显示，脑缺血再灌组3d时、海马 CAI区神经元开始减少人aspase－3人p阳性细胞数开始增加，sd达高峰，7d开始减少，而DM组Zd时，海马CAI区神经元减少人asPase－3／P阳性细胞数开始增加，4d达高峰，7 d开始减少，与正常缺血再灌注对照组比较有明显统计学差异河＜0．05)。 讨 论 慢性糖尿病和脑缺血再灌注损伤是引起认知障碍两个主要危险因素。海马在人和动物学习、记忆整合中起重要作用，认知障碍与海马区神经元变性＼坏死、缺失有密切关系。我们研究发现，慢性糖尿病作为附加因素，可进一步加重脑缺血再灌注海马神经元损伤，并且以海马区细胞凋亡形式为主。我们推测这种损伤机制可能为：①高血糖的毒性作用②局限性脑血流量减少，缺氧和能量代谢障碍③胰岛素缺乏；④脑内某些有保护作用的神经肽含量下 ·2·降。除此之外，其过程还有许多神经毒性物质参与，机制可能涉及海马神经元凋亡。本试验通过研究Caspase－3人p在慢性糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后海马区神经元的表达，来探讨慢性糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤的发病机制。 本研究发现了DM组caspase－3活性比缺血再灌组增强，casPase－3作为凋亡级联反应的关键酶参与了慢性糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤的病理过程，我们认为机制可能为：其一，高血糖作用；其二，细胞色素C急剧增强，其三，氧化应激和自由基毒性作用与Caspase－3活性机制有关；其四，与胰岛素减少和胰岛素样生长因子有关。以上说明高血糖和胰岛素缺乏使Caspase－3活性增强机制是慢性糖尿病加重脑缺血再灌注损伤海马神经元损伤机制之一。 本研究中，DM组海马神经元明的聚积变化与HE染色DM组海马神经元减少时间相符合，也与DM组的CasPase－3变化时间相符合，比缺血再灌注组增强。我们推测胰岛素缺乏导致邓过度沉积和高血糖增强了邓各种伤害性刺激，说明慢性糖尿病加重了明神经毒性作用是慢性糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一。 目前，慢性糖尿尿病出现缺血性脑血管并发症发生机制不明了，在超负荷血糖和胰岛素缺乏条件下，并发脑组织缺血后，凋亡的研究还处于初级阶段。CasPase－3和部与慢性糖尿病脑缺血再灌注海马神经元损伤关系在国内外还未见到报道。 总之，在超负荷血糖或胰岛素缺乏条件下，CasPase－3／P参与了慢性糖尿病加重脑缺血再灌注后海马神经元损伤的病理过程，推测caspase－3介导的细胞凋亡机制和邓神经毒性作用可能是慢性糖尿病加重脑缺血再灌海马神经元损伤机制之一，为慢性糖尿病并脑缺血后提早出现认知障碍的损伤机制增添了新的内容，也为其严重认知障碍的治疗提供了新的对策。 ·3· 结 论 1．慢性糖尿病是脑缺血再灌注损伤后