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目的:宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤。近年来宫颈癌的发病和病死率增加并有年轻化倾向,我国这一情况尤其明显。侵袭转移是导致临床治疗失败和死亡的主要原因。宫颈癌侵袭转移的具体调控机制目前仍不明确。作为宫颈癌的元凶,HPV除了参与癌症发生,在侵袭转移中又扮演何种角色,是本研究的主要目的。方法:利用人HPV+及HPV-配对宫颈癌细胞系,从细胞形态学、mRNA和蛋白水平,分别利用实时定量PCR和免疫蛋白印迹方法观察和检测干预HPV16E7表达对于细胞EMT现象的影响,并通过Transwell实验和细胞球形成实验检测HPV16E7诱导EMT改变后细胞运动侵袭能力及干细胞样特性的变化;随后通过实时定量PCR检测和筛选EMT/CSC调控网络相关基因的表达变化,挑选差异表达最为明显的Twist2在宫颈癌组织中利用免疫组织化学染色及统计学方法分析研究HPV16E7、Twist2和EMT之间的相关性;靶向干预Twist2后分别在mRNA和蛋白水平检测其在HPV16E7诱导EMT及相应运动和干细胞样特性中的作用,并且利用蛋白质免疫共沉淀的方法探索HPV16E7与Twist2的相互作用模式。结果:1. HPV16E7在宫颈癌细胞中能诱导EMT2. HPV16E7诱导的EMT伴随有运动能力和干细胞样特性的获得3. HPV16E7是EMT/CSC基因网络的关键调控因子4.宫颈癌组织中HPV16E7、Twist2和EMT的相关性研究5. Twist2在宫颈癌中是HPV16E7诱导EMT过程中的直接下游靶点。结论:HPV16E7通过直接靶向转录因子Twist2来诱导EMT和干细胞样特性进而促进宫颈癌的侵袭转移目的:前期研究发现转录因子Twist2在宫颈癌中是HPV16E7诱导EMT和侵袭转移的关键下游分子。本研究进一步在临床组织中探讨分析Twist2在宫颈癌淋巴结转移和预后中的作用。方法:收集144例宫颈癌临床标本组织及详细病例资料,并进行密切随访。利用免疫组织化学的方法检测组织中Twist2的表达情况,并利用统计学方法分析备项临床及分子指标与宫颈癌预后的相关性,并比较各指标之间的预判权重和相关性。结果:1.盆腔淋巴结转移、FIGO分期、wist2胞核表达是判断宫颈癌预后的独立预测指标2. Twist2胞核表达评估宫颈癌预后的效能次于盆腔淋巴结转移状态,并优于FIGO分期3. Twist2胞核表达与宫颈癌盆腔淋巴结转移及FIGO分期之间存在相关性结论:Iwist2胞核表达是判断宫颈癌淋巴结转移和预后的独立预测指标,目的:现有研究认为,EMT和衰老逃逸是肿瘤侵袭转移的关键机制。前期研究发现转录因子Twist2是HPV16E7诱导EMT和侵袭转移的关键下游分子并与宫颈癌的淋巴结转移和预后相关,本研究进一步探索Twist2在宫颈癌侵袭转移中的功能以及作用机制。方法:运用免疫组织化学方法检测宫颈癌组织中Twist2与EMT标志物(E-cadherin)和衰老标志物(CBX3)的相关性。利用正义pcDNA3.1(+)/Twist2质粒和靶向Twist2的小分子干扰RNA转染宫颈癌细胞SiHa,实时定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测EMT相关指标的变化以及通过Transwell实验观察细胞侵袭迁移能力的改变,并运用免疫细胞学染色和p-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老的变化。结果:1.宫颈癌组织中,Twist2与E-cadherin、CBX3的表达呈负相关,并与淋巴结转移状态存在相关性。2. Twist2能诱导宫颈癌细胞EMT的发生和运动侵袭能力的获得3. Twist2在宫颈癌细胞能诱导衰老逃逸。结论:Twist2通过诱导EMT和衰老逃逸来参与宫颈癌的侵袭转移。