小鼠卵巢玻璃化冻融过程FSH干预对卵泡存活及血管生成相关因子的影响

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:victor530505911
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目的:卵巢的低温保存成为女性生育力保持的一个有效策略,在癌症治疗后将之前冻/融卵巢组织移植回患者体内,从而恢复其卵巢功能,适合于儿童、青少年以及不能推迟癌症治疗的患者。目前,已有30多例健康婴儿来自移植的冷冻卵巢组织,证明这项技术被成功地实施。尽管这项技术有一个好的应用前景,但在卵巢移植后处在一个约48小时以上的缺血缺氧环境,导致大量卵泡的损失。我们的前期研究显示在小鼠卵巢玻璃化冻融过程中添加FSH后回移的无血管吻合移植卵巢血流再通的时间提前,生育能力提高,但相关机制尚不明了。故本研究目的是通过对小鼠卵巢玻璃化冻融过程中FSH的添加,探索FSH干预对解冻后卵巢无血管吻合移植前后的卵泡存活及血管重建相关因子的影响。  方法:将动情间期4周龄C57BL/6J小鼠卵巢随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)和0.3IU/mLFSH干预玻璃化冻存组(FSH-VG)。玻璃化冻融后将半卵巢移植于6周龄C57BL/6J雌鼠肾被膜下,于移植前(解冻后)和移植后48h对冻融卵巢内各级卵泡计数;通过免疫组织化学观察与血管生成及细胞存活相关的FSH-R、VEGF、Angpt-2、Kindlin-2、αvβ3、MMP-2、CD31、PCNA、Survivin在卵巢不同细胞中的定位;通过平均光密度(AOD)分析FSH-R、Angpt-2、Kingdlin-2在解冻后卵巢的表达量;通过Western-blot方法观察并分析FSH干预对解冻后卵巢整合素αv、β3、VEGF、PCNA蛋白及对解冻后及移植后48h卵巢MMP-2、CD31、Survivin蛋白表达量的影响。  结果:在解冻后及移植后48h,FSH-VG与VCG组在卵泡、基质细胞及纤维密度上较FCG组疏松,卵母细胞的完整性均不如FCG组,但与VCG相比,FSH-VG卵泡与基质结构排列整齐且较致密。无论是卵巢解冻后还是移植48h,原始卵泡、初级卵泡、正常卵泡及总卵泡数均为FSH-VG明显高于VCG组,但低于FCG组P<0.05,闭锁卵泡数为VCG组高于FCG及FSH-VG组,P<0.05;卵泡存活相关因子PCNA和Survivin蛋白检测显示,PCNA蛋白主要表达于卵巢颗粒细胞及卵母细胞核中,Survivin主要表达于卵母细胞中,在解冻后PCNA及Survivin Western-blot结果显示FSH-VG优于VCG组(P<0.05),但两组均低于FCG组;移植后48h Survivin蛋白表达量为FSH-VG与FCG之间没有明显差异,而VCG组低于FCG组。FSH-R主要分布于卵巢的卵泡颗粒细胞中,通过平均光密度(average optical density,AOD)统计结果显示,解冻后FSH-VG组与VCG组FSH-R表达量均均低于FCG组(P<0.05),但FSH-VG组的表达量高于VCG组,P<0.05;促血管内皮细胞分裂的VEGF蛋白主要定位于卵泡膜及间质中,解冻后的Western-blot统计结果显示VCG组与FSH-VG组VEGF蛋白表达量均低于FCG组,P<0.05,但FSH-VG组高于VCG组,P<0.05;Angpt-2免疫组化结果显示主要表达于颗粒细胞、卵母细胞,AOD统计结果显示解冻后FSH-VG组与VCG组Angpt-2表达量低于FCG组,P<0.05,但FSH-VG组Angpt-2表达量高于VCG组,P<0.01;Kindlin-2主要表达于颗粒细胞及卵母细胞,AOD统计结果显示解冻后FSH-VG组Kindlin-2表达量与FCG组之间无统计学差异,FCG与FSH-VG均高于VCG组(P<0.01、p<0.05);整合素αvβ3几乎表达在卵巢所有细胞上。解冻后的Integrinαv Western-blot结果显示其表达在三组间没有明显差异,P>0.05。而Integrinβ3Western-blot结果显示FCG与FSH-VG组表达量均高于VCG组(P<0.05),FCG与FSH-VG之间没有明显差异;MMP-2其主要定位卵巢颗粒细胞和细胞外基质(ECM),Western-blot结果显示MMP-2蛋白在解冻后三组之间没有明显的统计学差异,而在移植后48h FSH-VG组与FCG组之间没有明显差异,VCG组MMP-2蛋白表达量低于FCG组,P<0.05;CD31其主要定位于成熟血管内皮细胞,Western-blot结果显示在解冻后三组之间没有明显差异,而在移植后48h FSH-VG组与FCG组之间没有明显差异,VCG组CD31蛋白表达量低于FCG组,P<0.05。  结论:1.小鼠卵巢玻璃化冻融过程中添加0.3IUmL-1FSH可以上调解冻后FSH-R、上调与血管生成相关因子VEGF、Angpt-2、Integrinβ3、Kindlin-2;上调移植后48h MMP-2、CD31;2.小鼠卵巢玻璃化冻融过程中添加0.3IUmL-1FSH可以上调与卵泡存活相关因子PCNA和Survivin的表达;3.卵巢玻璃化冻融过程中FSH的添加可能通过促进血管生成及抗凋亡作用增加冻融及移植卵泡的存活。
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