转录因子Sp1对肺腺癌细胞A549中生存素的转录调控

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目的:探讨转录因子-特异性蛋白1(specificity protein1,Sp1)在肺腺癌细胞A549中对生存素(survivin)转录调控的作用。  方法:1.免疫组化SP法检测120例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者和40例良性肺疾病患者手术标本中survivin和Sp1蛋白的表达情况,并分析两者表达的相关性。2.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测人肺腺癌细胞株-A549细胞中survivin和Sp1 mRNA的表达。3.在本室构建好的含survivin核心启动子的荧光报告载体上,基因定点突变survivin核心启动子上经电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)证实存在的-121bp~-116bp处的Sp1结合位点,并转染至A549细胞中,测定萤光素酶的表达活性,比较survivin核心启动子片段及其突变体在A549细胞中的表达活性差异。4.化学合成法构建靶向Sp1基因的RNA小干扰片段(small interference RNA,siRNA),脂质体介导转染至A549细胞,荧光定量RT-PCR及Western-blot法检测Sp1及survivin mRNA和蛋白表达。  结果:1.NSCLC组织中survivin和Sp1的阳性表达率分别为81.6%(98/120)和62.5%(75/120);良性肺疾病组织中两者阳性表达率分别为0和7.5%(3/40),二者表达呈正相关(rs=0.214, P<0.05)。2. A549细胞中survivin和Sp1 mRNA均表达。3.含有survivin核心启动子(pGL3-SVP230-luc)及其突变体(pGL3-SVP231-luc)的萤光报告载体在 A549细胞中的活性,均高于阳性对照组 pGL3-control和阴性对照组 pGL3-basic(p<0.05)。在 A549细胞中, pGL3-SVP230-luc的相对活性为40.99;高于pGL3-SVP231-luc的25.94(p<0.05)。4.通过RNAi下调Sp1的表达,能降低A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达。  结论:1.非小细胞肺癌组织中survivin蛋白和Sp1蛋白均高表达且二者表达呈正相关。2.A549细胞内survivin和Sp1mRNA均高表达。3.survivin启动子上的Sp1结合位点-121bp~-116bp对其活性具有正性作用。4.靶向Sp1的siRNA,可下调survivin mRNA和蛋白表达。
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