【摘 要】
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目的:研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)对乳腺癌IMDA-MB-231细胞的生物学行为及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase,MMP-2)和骨桥蛋白(osteopont
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目的:研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)对乳腺癌IMDA-MB-231细胞的生物学行为及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase,MMP-2)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响,探讨MSC对乳腺癌细胞的作用靶点。
方法:
用不同浓度的MSC处理培养的MDA-MB-231细胞,CCK.8(cell counting Kit-8)试剂盒、流式细胞仪(flow cytometry,FCM)及软琼脂生长实验分别检测其对细胞生长、细胞周期分布和凋亡及肿瘤细胞恶性表型的影响,RT-PCR和Westernblot检测MMP-2和OPN mRNA和蛋白水平的表达,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbem assay,ELISA)检测细胞培养液中MMP-2蛋白浓度。
结果:
(1)MSC处理的细胞生长被抑制,出现S期阻滞和凋亡,并呈时间和剂量依赖关系,且细胞集落形成数明显减少。
(2)50μmol/L MSC处理细胞48 h和72 h后,MMP-2 mRNA表达水平分别较对照组上调32%和47%(P<0.05),100μmol/LMSC处理细胞48 h和72 h后,MlVIP-2 mRNA表达水平分别较对照组上调53%和61%(P<0.05)。而Westernblot结果却显示,与对照组相比,25μmol/L MSC处理细胞72 h后MMP-2蛋白表达水平下调33%(P<0.05);50 μmol/L MSC处理细胞48和72 h后,MMP-2蛋白表达水平下调42%和51%(P<0.05);100μmol/L MSC处理细胞48和72h后细胞的MMP-2蛋白表达水平分别下调73%和81%(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与对照组相比,25μmol/L MSC处理细胞48 h和72 h后,MMP-2浓度分别下调36.42%和60.63%(P<0.05);50μmol/L MSC处理细胞24 h、48 h和72 h后,MMP-2浓度分别下调20.80%、60.70%和76.69%(P<0.05);100μmol/L处理细胞24 h、48 h和72 h后,MMP-2浓度分别下调24.44%、73.28%和83.59%(P<0.05)。
(3)RT-PCR和Western blot对OPN的检测结果显示不同浓度MSC处理细胞6 h、24 h、48 h和72 h后,OPN的表达均无明显改变。
结论:
MSC抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,诱导其s期阻滞及凋亡,降低细胞恶性程度。MSC上调该细胞MMP-2 mRNA的表达,但下调其蛋白的表达,显示转录与蛋白水平的不一致性,提示可能存在一正反馈调节。MSC对该细胞OPN的表达无明显影响。
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