目的:肝癌是一种对人体危害很大的疾病，是所有癌症中死亡率最高的恶性肿瘤之一。甲胎蛋白(AFP)是目前临床中最常见的诊断肝癌的肿瘤标志物之一，但AFP的灵敏度不足以满足临床，因此迫切需要新的生物标志物用于肝细胞癌(HCC)的早期筛查以降低其死亡率。本研究的目的是通过质谱法发现和验证HCC特异性生物标志物。本课题拟采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术筛选HCC和肝硬化患者血清中的差异蛋白，并通过液质联用结合生物信息学技术对发现的具有诊断价值的差异蛋白进行鉴定;进而采用大量临床样本验证筛选和鉴定的差异蛋白在肝癌早期筛查和预警中的价值，以确定其作为肝细胞癌诊断的潜在标志物的价值。该研究对肿瘤的进展和预后诊断和治疗效果评价具有着重要意义，并对临床的预后有着重要的指导作用。　　方法:(1)本课题收集80例肝硬化患者血清和30例HCC患者的血清，用MALDI-TOF MS质谱技术分析两组患者血清样本中的差异性多肽。(2)采用Clinpro tools软件的建模功能，建立基于遗传算法(GA)、监督神经网络（SNN）和快速分类器(QC)三种算法的数学分类模型。收集56例肝癌患者血清进行盲样验证。(3)采用qTOF Synapt G2-S串联质谱对筛选出的差异峰进行鉴定，确定具有诊断价值的多肽片段来源，为进一步研究新的诊断标志物提供基础。(4)分别对肝硬化、肝癌组织和癌旁组织进行免疫组化分析，明确ITIH4在不同组织中的表达差异。(5)采用RT-PCR方法研究在肝硬化和肝癌组织样本中ITIH4mRNA的表达差异。(6)对109例肝硬化患者随访2年，计算HCC的发病率，比较在发展为HCC及未发展为HCC两组患者血清中ITIH4浓度的差异，明确ITIH4作为HCC预警标志物的价值;(7)分别留取611例健康对照、慢性病毒性肝炎、肝硬化和HCC患者血清，采用ELISA方法检测ITIH4在各组样本中的浓度，明确ITIH4对HCC的诊断价值;(8)对93例HCC术后患者进行2年随访，比较不同浓度ITIH4患者术后复发的情况，采用Kaplan Meier和生存分析方法探讨ITIH4浓度对HCC患者术后复发情况的风险。　　结果:(1)通过Clinpro tools软件分别对肝硬化及HCC血清样本进行差异性多肽分析，以信噪比(S/N)＞5作为多肽峰筛选标准，共获得多肽峰89个，其中6个多肽峰在肝硬化及肝癌组间具有统计学差异(P＜0.05)，分子量为3156Da的多肽峰表达丰度高，差异性显著，具有作为HCC诊断标志物的潜在价值;(2)模型验证的结果显示:SNN模型的重识别率最高(100％)，GA模型的交叉验证准确率最高(83.27％)(3)用qTOF Synapt G2-S串联质谱对筛选出的差异峰进行鉴定，证实分子量为3156Da的多肽峰为ITIH4蛋白片段。(4)免疫组化结果检测ITIH4在肝硬化组织中表达阳性率为100％(6/6)，在肝癌组织中表达阳性率为84.6％(11/13)，癌旁组织表达阳性率为(6/13)46.2％,三组表达阳性率存在显著差异(p=0.022)。(5)ITIH4基因在肝硬化和肝癌组表达无显著差异。其检出率在肝硬化中高于肝癌。(6)比较ITIH4浓度在2年内发展HCC的患者（HCC组）和未发展HCC的患者（非HCC组）的变化，证实低血清浓度ITIH4患者发展为HCC的风险性更高（RR=0.4），动态血清浓度结果显示，患者由肝硬化发展成HCC后，血清ITIH4显著降低(p=0.004)。(7)血清ITIH4浓度在正常对照、慢性乙肝、肝硬化及HCC患者血清中存在显著差异，其中肝硬化组浓度最高，而肝癌组则高于正常对照及病毒性肝炎组(p＜0.05)，ITIH4鉴定肝硬化和HCC的诊断AUC=0.626。(8)Kaplan-Meier分析和Log-rank检验显示，具有低ITIH4水平的患者具有显着更高的复发率(p=0.000)。　　结论:我们通过MALDI-TOF MS结合磁珠技术得到一个具有HCC诊断价值的差异血清蛋白，用q-TOF串联质谱技术鉴定该蛋白为ITIH4，从而进一步对肝脏肿瘤的诊断和预防研究提供了重要基础。我们通过大样本队列和随访研究，证实ITIH4可作为HCC早期预警和预后评估标志物，具有很好的临床应用价值。