琐琐葡萄多糖、黄酮的提取及其对小鼠免疫功能的影响

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目的:利用植物化学的方法提取琐琐葡萄的两种活性成分琐琐葡萄多糖(VTP)和琐琐葡萄总黄酮(VTF),进行定性定量分析,并分别研究两种活性物质对免疫低下模型小鼠免疫功能的影响。方法:(1)经热水提取、乙醇沉淀、Sevage法除蛋白、水相透析提取纯化得VTP,采用理化反应、红外光谱和气相色谱对提取物进行鉴定和初步结构分析,苯酚-硫酸法测定多糖含量,间羟基联苯法测定VTP中半乳糖醛酸含量;采用乙醇回流提取、有机溶剂萃取、大孔吸附树脂富集、不同浓度的乙醇-水梯度洗脱提取分离得VTF,紫外分光光度法测定总黄酮含量。(2)应用环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型,以不同剂量的VTP和VTF作为受试物灌胃给药30天,分别研究VTP和VTF对免疫低下模型小鼠脾脏及胸腺指数、抗体分泌细胞功能、血清溶血素水平和脾脏淋巴细胞转化功能的影响。结果:(1)建立了综合应用水提醇沉法、醇提法、有机溶剂萃取法及大孔吸附树脂富集、乙醇-水梯度洗脱一步提取分离VTP和VTF的工艺;琐琐葡萄提取物VTP Molish反应呈阳性,红外吸收光谱在3417、2916、1747、1633、1423、1105 cm-1处表现为典型的多糖吸收峰;气相色谱检测结果表明VTP主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为0.27:0.97:0.90:2.23:0.83:1.40。硫酸咔唑反应呈阳性,提示VTP提取样品中含糖醛酸,含量为38.17%,RSD为1.65%;VTP粗提物中多糖含量为20.68%,RSD为1.93%,纯化物中多糖含量为36.11%,RSD为1.29%;VTF提取物中总黄酮含量为35.28%,RSD为1.42%。(2)与模型组相比,VTP中剂量组、VTF低、中、高剂量组均可增加脾脏的重量(P<0.05),VTP和VTF各剂量组对胸腺指数的影响与模型组比较无统计学差异(P>0.05);与模型组相比,VTP低、中、高剂量组,VTF低、中剂量组均可有效促进小鼠脾淋巴细胞的转化功能(P<0.01);除VTF高剂量组外,其他各组均能改善小鼠抗体生成细胞的功能(P<0.05),VTP3个剂量组和VTF中剂量组均可使红细胞半数溶血值增高(P<0.05)。结论:本研究所建立的VTP和VTF一步提取法简便易行、经济高效、含量较高;VTP主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成;VTP和VTF均可显著改善免疫低下模型小鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能,在高剂量VTP(1042mg/kg·BW)和中剂量VTF(120mg/kg·BW)作用下,试验系统显示出显著而稳定的免疫增强作用。
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