屏障自整合因子（Barrier to autointegration factor,BAF）是一种小型、普遍存在且高度保守的蛋白,主要定位于细胞核,据报道其主要在染色质结构、分离和核分裂后的核组装中起作用。BAF-L是BAF的同源新基因,其蛋白质序列与人源BAF有53%的相似性。BAF-L是一种核蛋白,但与BAF不同,BAF-L不结合DNA。除此之外,BAF-L与BAF表达模式也不同,有报道表明BAF-L m RNA在胰腺和睾丸中高度表达,但对该蛋白在胰腺和睾丸中功能的相关研究比较缺乏。因此,本研究在制备高滴度、特异性的BAF-L多克隆抗体的基础上,首先明确BAF-L的时空表达特性和细胞定位情况,其次研究BAF-L对小鼠胰腺和睾丸发育的影响,然后验证其与重要核蛋白的相互作用,以为探究BAF-L在小鼠胰腺和睾丸中功能的研究奠定基础。具体研究结果如下:1.成功制备了高滴度、特异性的BAF-L多克隆抗体通过扩增小鼠睾丸组织BAF-L CDS区全长序列,构建重组质粒并命名为p GEX-4T-1-BAF-L,适宜条件诱导重组蛋白的原核表达,并将获得的重组蛋白进行纯化。将乳化后的重组蛋白于新西兰大白兔背部皮下进行4次免疫,最后放血获得BAF-L多克隆抗体。经琼脂扩散试验鉴定,BAF-L多克隆抗体的琼脂扩散效价达1:8;Western blots结果显示,该抗体能特异性识别在293T细胞过表达BAF-L蛋白。2.明确BAF-L在小鼠胰腺和睾丸中的表达特性基于购买的BAF-L基因敲除小鼠,通过western blots验证了BAF-L蛋白的缺失,进一步明确了BAF-L多克隆抗体的特异性;利用制备的抗体通过western blots发现BAF-L蛋白主要在睾丸、胰腺、脾脏等组织表达,其中胰腺和睾丸中表达最高。在发育时间上看,BAF-L在胰腺中的表达量从小鼠出生到成年并未出现明显的年龄依赖性;BAF-L在睾丸中的表达量从小鼠出生后两周开始持续升高,并在成年后一直保持在较高水平;在细胞定位上,利用制备的抗体进行免疫组化染色发现BAF-L在睾丸组织中主要定位于细胞核。3.BAF-L的缺失对胰腺没有明显的异常影响,而在睾丸组织中,BAF-L通过与组蛋白和鱼精蛋白的相互作用来调节组蛋白和鱼精蛋白的交换过程通过对不同年龄段小鼠的胰腺组织进行HE、免疫组化等染色,发现BAF-L的缺失不影响胰腺的发育和胰岛素的分泌,表明BAF-L不参与胰腺的发育进程和功能调节;在睾丸组织中,由于BAF-L核定位的特性,为了验证BAF-L是否与组蛋白相互作用,通过免疫沉淀实验验证了BAF-L与组蛋白、鱼精蛋白的相互作用。免疫荧光染色发现敲除小鼠的变态精子细胞中仍然存在大量的组蛋白,结合q RT-PCR发现鱼精蛋白以及过渡蛋白在敲除小鼠中的表达水平明显降低。苯胺蓝染色分析发现敲除小鼠中精子含有大量的组蛋白,以上结果说明了BAF-L通过与组蛋白和鱼精蛋白的相互作用来调节其交换,从而在精子发生中发挥关键作用。Western blots结果显示,在敲除小鼠中组蛋白H3、H4乙酰化修饰水平显著降低,表明BAF-L缺失使组蛋白乙酰化缺陷进而导致精子细胞的异常发育。综上所述,本研究成功获得了特异性的BAF-L多克隆抗体,并应用该抗体通过western blots表明BAF-L蛋白在胰腺和睾丸中表达量最高,但其不参与小鼠出生后胰腺的发育进程和功能的维持。在小鼠睾丸组织中,BAF-L通过与组蛋白和鱼精蛋白的相互作用来调节组蛋白和鱼精蛋白的交换,从而在精子发生过程中发挥重要作用。