研究背景阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种发生于中枢神经系统的退行性病变,是目前老年人痴呆的最主要类型,至今病因不明。全球范围内约35,000,000人罹患此病。该病特征性表现是进行性记忆力减退和认知功能障碍。AD病理学的特征性改变为β-淀粉样肽(β-amyl oid, Aβ)沉积形成的老年斑,由tau蛋白异常聚集形成的神经原纤维缠结,大脑皮层细胞不同程度的减少,以及星形胶质细胞的增生和肥大。AD原因错综复杂,其中神经炎症机制在阿尔茨海默病的发生和发展进程中发挥了重要作用,Ap沉积激活小胶质细胞引起的炎症反应可能是AD的核心病理机制。TOLL-样受体(Toll-like recepter, TLR)家族成员可通过识别各种病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)引发机体免疫反应,一些列研究证实Toll样受体2(TLR2)可能在AD的神经变性机制和病情进程中起到重要的作用。而且,TLR2参与细胞对AD相关Aβ的摄取及清除。我们以前的研究已经证实TLR2基因改变与AD的遗传易感风险相关。在人类,TLR2基因均有许多多态性位点,他们所在区域为AD遗传易感相关区域。因此我们首次提出TLR2基因遗传多态性可能为AD的遗传风险因子,而外周血单核细胞TLR2基因和蛋白表达量可能为AD的早期诊断生物标志。方法本研究采用美国神经病学、语言障碍和卒中研究所-老年性痴呆和相关疾病学会(NINCDS—ADRDA)中“很可能AD(probable)"标准,选择LOAD患者60例(年龄≥65岁,民族为汉族,女性33例,平均年龄80.2±8.2岁),并选择同期就诊的60例健康查体者作为对照(女性34例,平均年龄80.6±6.3岁)。所有研究对象均为中国北方汉族人且无亲缘关系。所有入选病人均禁食12小时,抽取清晨空腹血各5.5mLEDTA抗凝,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术、流式细胞术、单管双向等位基因特异性扩增分别对mRNA、血浆蛋白表达进行检测。使用SPSS11.5统计软件进行统计分析。病例组和对照组各种特征的比较采用t检验或卡方检验。多组之间的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用Bonferroni法。使用Pearson积矩相关来评估mRNA、蛋白与MMSE评分的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。所有统计学检验均为双侧概率检验,以P<0.05为差异有统计学意义的标准。测定研究对象的一般特征,确保两组研究人员在年龄、性别、BMI、血压数值、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、胆固醇、血糖上均无显著差异。结果结果发现和健康对照组相比,病例组中TLR2mRNA的表达均高于对照组(TLR2:0.390±0.204比0.281±0.167,P<0.01)。病例组中TLR2的蛋白表达也显著高于健康对照组(TLR2:97.12±1.67%比41.07±18.44%, P<0.01)。且无论在病例组还是健康对照组,TLR2mRNA的表达均与TLR2蛋白的表达显著相关(分别为TLR2:r=0.980和0.976,P<0.01;)。结论本实验首次对中国北方汉族人群TLR2在LOAD患者外周血中mRNA和血浆蛋白水平的表达进行研究,LOAD组TLR2mRNA及其蛋白水平明显增加,而且TLR2mRNA水平与TLR2的蛋白表达有明显的相关性,证明中国北方汉族人群TLR基因表达与LOAD易感性有关。研究背景To1l样受体的研究历史虽然仅仅20年,但Toll样受体的发现开创了我们理解先天免疫细胞如何识别外源性(即微生物品种)以及内源(即机体衍生物)致病分子,随后引发炎症反应机制的新纪元。这些研究提供了先天免疫系统复兴的飞跃。对免疫学领域的研究发现,在系统发生上保守的先天性免疫不仅提供了防御微生物入侵的第一道防线,而且还影响组织的损伤反应,控制适应性免疫的活性。阿尔茨海默氏病(AD)的特征表现是脑皮质内形成不溶性β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积物。沉积物的形成与小胶质细胞介导的炎性反应有关。近期研究表明Toll-样受体(Toll-like recepter, TLRs)参与该炎性反应。TLR家族成员可通过识别各种病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern, PAMP)引发机体免疫应,一些列研究证实Toll样受体4(TLR4)可能在AD的神经变性机制和病情进程中起到重要的作用。而且,TLR4参与细胞对AD相关Aβ的摄取及清除我们以前的研究已经证实TLR4基因改变AD的遗传易感风险相关。我们先前的大量研究发现TLR4基因有许多多态性遗传位点,与AD的遗传易感相关。因此我们首次提出TLR4基因遗传多态性可能为AD的遗传风险因子,而外周血单核细胞TLR4基因和蛋白表达量可能为AD的早期诊断生物标志。方法本研究采用美国神经病学、语言障碍和卒中研究所-老年性痴呆和相关疾病学会(NINCDS—ADRDA)中“很可能AD(probable)"标准,选择LOAD患者60例(年龄≥65岁,民族为汉族,女性33例,平均年龄80.2±8.2岁),并选择同期就诊的60例健康查体者作为对照(女性34例,平均年龄80.6±6.3岁)。所有研究对象均为中国北方汉族人且无亲缘关系。所有入选病人均禁食12小时,抽取清晨空腹血各5.5mLEDTA抗凝,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术、流式细胞术、单管双向等位基因特异性扩增分别对mRNA、血浆蛋白表达及Toll样受体4(TLR4)基因3’UTR11367位点的基因多态性进行检测。使用SPSS11.5统计软件进行统计分析。病例组和对照组各种特征的比较采用t检验或卡方检验。多组之间的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用Bonferroni法,P<0.05为差异有统计学意义。所有统计学检验均为双侧概率检验,以P<0.05为差异有统计学意义的标准。测定研究对象的一般特征,确保两组研究人员在年龄、性别、BMI、血压数值、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、胆固醇、血糖上均无显著差异。结果结果发现和健康对照组相比,病例组中TLR4mRNA的表达均高于对照组(TLR4:0.503±0.195比0.322±0.183,P<0.01)。病例组中TLR4的蛋白表达也显著高于健康对照组(TLR4:66.56±23.74%比14.83±4.31,P<0.01)。且无论在病例组还是健康对照组,TLR4mRNA的表达与TLR4蛋白的表达显著相关(TLR4：r=0.938和0.970,P<0.01)。在病例组中,TLR4在基因型为CC中的蛋白表达水平显著低于在基因型为GG纯合子和GC杂合子中的表达水平。而在健康对照组中,TLR4的蛋白表达水平在三种基因型中差异无统计学意义。结论本实验首次对中国北方汉族人群TLR4在LOAD患者外周血中mRNA和血浆蛋白水平的表达进行研究,LOAD组TLR4mRNA及其蛋白水平明显增加,而且TLR4mRNA水平与TLR4的蛋白表达有明显的相关性。TLR4基因3’UTR11367基因型CC增加LOAD患者全血TLR4蛋白表达,证明中国北方汉族人群TLR基因表达与LOAD易感性有关。