目的与背景 最近研究表明胃癌与140多种基因及其蛋白产物密切相关，不仅包括多种癌基因和抗癌基因以及细胞周期相关基因，还和表皮生长因子1、血小板生长因子A、三叶因子等生长因子有关。1988年，Correa提出了肠型胃癌自然史模式假说，该假说认为胃黏膜从正常到肿瘤的进展过程为：浅表性胃炎→慢性萎缩性胃炎肠上皮化生→中重度异型增生→早期胃癌→进展期胃癌。多种因素共同作用使得胃黏膜逐步发展到癌前病变再发展到胃癌。从正常胃黏膜到癌前病变过程及癌前病变至胃癌过程皆存在特征性的基因差异表达，只有找出这些基因及其蛋白质产物表达水平的变化与胃癌发生发展不同阶段的相互关系及其规律，才有可能早期发现胃癌。既往对抑癌基因及其蛋白表达与胃癌发生发展关系的研究集中在P53、P16、P27、P33、RB(Retinoblastomagene)和DCC(Deletedincolorectalcancer)捞次才笋医笋虎肠釜尹世居戈等，关于三叶因子家族及其蛋白质在胃癌发生和胃私膜病变演进过程中作用的研究甚少。三叶因子家族是近十几年来发现的胃肠道勃膜保护因子。人类三叶因子家族由三种成员组成，包括三叶因子I(Trefoil faetorl，TFFI)、三叶因子11(Trefoil faetor2，TFFZ)、三叶因子川(Trefoil faetor3，TFF3)。三者的共同特点是在其蛋白质的二级结构中均含有三叶草形状的结构域。正常生理条件下，三叶因子在胃肠道的表达具有组织特异性，TFFI主要分布于胃，TFFZ分布于胃窦和十二指肠，TFF3主要分布于小肠和大肠。当胃肠勃膜受到损伤时这种特异性消失，并且表达增加。实验证实，TFFS不仅能促进胃肠道勃膜损伤的修复，还和胃肠道肿瘤有关。TFFI基因敲除小鼠模型中，所有小鼠胃上皮细胞均出现严重增生、高度发育不良及胃窦部腺瘤形成，部分发展为胃浸润型腺癌。另有研究发现，TFFI可抑制胃腺癌AGS细胞系的增殖，且其抑制作用呈剂量依赖性。其中，TFFI二聚体较单聚体具有更显著的生物学活性。Pia Azarschab等用RT一PCR方法发现阿斯匹林能引起TFFZ表达升高6倍，这与长期口服阿司匹林能一定程度预防胃癌是否相关尚不清楚。由此人们推测三叶因子有可能是胃肿瘤抑制因子。本实验采用免疫组化方法分别在正常胃勃膜、胃薪膜肠上皮化生、胃薪膜不典型增生和胃癌组织的石蜡包埋标本中对TFFI、TFFZ进行了定位和半定量检测。观察这两种蛋白在胃勃膜病变演进过程中表达的变化，以探讨TFFI、TFFZ在癌前病变及胃癌发生中的作用和意义。所有标本来自病理科1999年1月一2001年1月归档蜡块，从中选取正常胃勃街左!又.梦医李虎肠全笋世绘文膜(对照组)、胃猫膜肠上皮化生(肠上皮化生组)、胃猫膜不典型增生(不典型增生组)、胃癌(胃癌组)各30例。其中男性88例，女性32例，中位年龄53.5岁。除胃癌组织为手术切除标本外其余均为胃镜活检标本，胃癌病例术前均未接受化疗和放疗。所有蜡块标本连续切层各切3片，2片行免疫组化染色，1片行HE染色。所有病例均经病理证实。抗TFFZ蛋白抗体为兔抗人单克隆抗体，由A.GIRAUD教授(澳大利亚WESTERN医院)惠赠。抗TFFI蛋白抗体为鼠抗人单克隆抗体(MAB一0231)，购自福州迈新生物技术开发公司，免疫组化试剂盒(Kit一9710)亦为福州迈新生物技术开发公司产品。组织切片经脱蜡和水化后，按链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶免疫组化试剂盒说明规范操作，每张切片加1滴过氧化物酶阻断剂，室温孵育10分钟;TBS液冲洗;加入非免疫动物血清，室温孵育10分钟，甩干后加入一抗(抗TFFI抗体为即用型，抗TFFZ抗体用抗体稀释液稀释成1:5000)室温孵育1小时:TBS液冲洗，加入生物素标记的二抗室温孵育10分钟:TBS液冲洗，加入链亲和素一过氧化物酶溶液室温孵育10分钟;TBS液冲洗，DAB显色:苏木素复染;170盐酸酒精分化20秒:60℃蒸馏水返蓝10分钟:梯度酒精脱水;中性树脂封片;细胞内出现黄色或棕黄色为阳性。结果判定时阳性信号为胞浆中出现黄色或棕黄色染色。综合染色强度和阳性范围进行分级。取表达最强的部位，按染色强度分为:基本未着色、染色与背景相似者为0分;着色浅、略高于背景者为l分;中度着色明显高于背景者为2分;强染、着色深棕色者为3分。阳性范围:成10%为0分，11%一25%为1分，26%~50%为2分，50%一75%为3分，>75%为4分。两项相加后分4级:O一1分为阴性C)，2分为阳性(+)，3~4分为(++)，5分以上为(+++)。礴左二才笋医.劣劣口毖笋世老戈统计学处理应用SAS 8.0统计软件，采用非参数秩和检验与Spe~an相关检验，用平均秩次表示蛋白表达的综合强度。羞星一、不同胃勃膜病变中TFF[蛋白的表达TFFI的反应物呈黄色或棕黄色，主要位于细胞浆，细胞基底侧的染色强度高于腔面侧。阳性表达位于大部分上皮、腺体和上皮表面勃液。胃小凹深部和浅部腺体染色稍强，浅部腺体的染色强于深部腺体。在30例正常胃乳膜中“一”0例“++”18例，“+++”例例.且气j“+”“+”7例，““+十”21例，“+++”11例。30例肠上皮化生组织中‘、一”2例，4例。不典型增生组织中