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垂体腺瘤是一种常见的颅内肿瘤,在颅内肿瘤的发生率仅低于胶质瘤和脑膜瘤,约占颅内肿瘤的15％,人群的发生率约为1/1000。近来一些报道显示临床相关的垂体腺瘤的发生率是以前的3.5倍,且有上升的趋势。侵袭性垂体腺瘤常为良性垂体肿瘤,却有恶性肿瘤的生物学行为,向周围组织侵润生长,压迫和包绕周围的神经血管,药物治疗效果差,手术全切除难度大,术后伤残率及死亡率极高,且治疗后易复发,是目前神经外科治疗上的一个难题。甘丙肽,P21,CD44可能在垂体腺瘤的侵袭生长过程中发挥重要作用。
目的:通过检测垂体腺瘤标本中甘丙肽,P21,CD44在RNA水平的表达,分析其表达水平在侵袭组和非侵袭组组间是否存在差异,探讨三者与垂体腺瘤侵袭性的关系,为治疗侵袭性垂体腺瘤寻找新的分子治疗靶点。
方法:实验标本取材于首都医科大学附属天坛医院2009.4-2011.9期间垂体腺瘤病人。所有标本均为行经蝶或开颅显微手术切取的新鲜肿瘤组织,离体后迅速储存于液氮中,共计134例,其中男性62例,女性72例,平均年龄44.9±12.6岁。按照Knosp分级标准将标本分为5级,0-2级入非侵袭组,3-4级入侵袭组(术中观察到有侵袭行为的也列入侵袭组)。实验中依次行Trizol一步法提取所有标本中的总RNA,紫外分光光度计测定RNA纯度,1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,RT-PCR的方法反转录为cDNA,q-PCR的方法检测各标本中甘丙肽、P21、CD44在RNA.水平的表达。使用SPSS16.0统计软件对实验数据进行统计学分析,实验数据为非正态分布,差异性比较采用非参数检验,以P＜0.05表示有统计学意义,有明显的差异性;相关性研究采用Spearman检验。
结果:实时荧光定量PCR结果示:侵袭组中甘丙肽,P21,CD44的RNA表达水平与GAPDH的比值(rq值,为相对含量)分别为(0.283±0.840、19.647±17.735、7.889±8.378),非侵袭组中三者与GAPDH的比值(rq值)分别为(0.960±2.694、16.414±13.977、14.956±17.100)。非参数检验分析侵袭组中甘丙肽RNA表达水平较非侵袭组降低,其差异性有统计学意义,(P=0.037＜0.05);P21和CD44 RNA水平的表达在侵袭组和非侵袭组中无明显差异性,P值分别为0.511,0.086,P＞0.05。Spearman相关分析示CD44和甘丙肽两者在RNA水平的表达存在高度相关(R=0.370 P＜0.01);单因素方差分析(One-wayANOVA)示甘丙肽,P21和CD44的RNA表达在垂体腺瘤各级别间均无差异性。按照内分泌分型,甘丙肽在各型垂体腺瘤中都有表达,其RNA表达水平在无功能腺瘤(63例)中侵袭组和非侵袭组组间有明显差异性,P=0.012,P＜0.05,在泌乳素腺瘤,生长激素腺瘤,促性腺激素腺瘤无差异性,P值分别为O.181,0.892,0.838。
结论:
1甘丙肽RNA在侵袭组的表达水平明显低于非侵袭组,说明甘丙肽的表达下调可能导致垂体腺瘤的侵袭行为,由此推测甘丙肽可能对垂体腺瘤侵袭性的发生有抑制作用,从而为治疗侵袭性垂体腺瘤提供了新方向。
2 P21,CD44的表达在侵袭组和非侵袭组间没有表现出差异性,推测①P21,CD44表达与垂体腺瘤的侵袭性并不相关;②P21,CD44与垂体腺瘤的侵袭性相关,但因标本数目未能达到统计要求数量,故不能较好地反映总体情况。
3 CD44与甘丙肽在RNA水平的表达有明显的正相关性,推测甘丙肽在抑制垂体腺瘤侵袭的过程中,CD44发挥辅助作用。甘丙肽、P21、CD44在各型的垂体腺瘤中都有表达,其表达水平在垂体腺瘤各级别间并无差异,这说明随着侵袭级别的增高,三者均无趋势变化。