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研究背景:氯吡格雷代谢的关键酶CYP2C19的不同基因变异会引起其活性的不同改变,从而导致药物代谢和药物功效发生变化,使得患者对药物产生差异反应。目前大部分研究主要集中在对CYP2C19*2、*3、*17等基因多态性与氯吡格雷代谢相关性进行研究,针对CYP2C19基因突变与氯吡格雷代谢的相关性研究及其与氯吡格雷抗血小板凝集功能机制的体外研究未见报道。研究目的:本研究主要探索国人冠心病(CHD)患者CYP2C19基因变异及其对氯吡格雷抗血小板活性的影响。研究方法:1.根据CHD指南诊断标准,收集南昌大学第二附属医院1493例经皮冠状动脉(PCI)术后口服氯吡格雷和阿司匹林双联抗血小板治疗的CHD患者的基本临床资料及外周静脉血标本,选取1022例遗传背景和年龄性别相匹配的健康人群作为对照。将出血、再发心绞痛、心肌梗死等不良心血管事件作为终点事件,对患者平均随访时间为12个月。2.提取所有患者及健康对照的DNA样本,用sanger一代测序法对患者及对照组进行CYP2C19基因全外显子及外显子和内含子交界区测序,如在患者中发现基因变异,通过与1022例健康人群相比较,以明确是否为基因突变。3.构建CYP2C19基因野生型和突变质粒,选择人正常肝脏细胞HL-7702作为目的细胞。在HL-7702细胞中转染相同剂量的CYP2C19野生型质粒及突变质粒。转染24小时后,收集细胞。4.提取肝S9蛋白并测定其浓度,用western blot方法检测各组质粒转染量和CYP2C19蛋白表达量。在质粒转染效率一致的前提下,调整肝S9蛋白浓度,与氯吡格雷共孵育后作用于血小板,运用AggRAM血小板聚集仪检测血小板聚集率和人血管舒张剂激活磷蛋白(VASP)ELISA试剂盒检测VASP水平,了解氯吡格雷对血小板的抑制情况,在体外对CYP2C19酶活性变化进行分析。研究结果:1.本研究共发现CYP2C19 80G>T(G27V)、389C>A(T130K)、407T>A(M136K)、831C>A(N277K)、1414G>A(V472I)等5个基因突变,其中80G>T为新发突变。这5个基因突变对CYP2C19酶活性影响的功能研究未曾见报道。2.体外功能研究发现,407T>A基因突变组的血小板聚集率较野生组低48.8%(P<0.05),同时,人血管舒张剂激活磷蛋白(VASP)水平相比于野生组高22.0%(P<0.05),说明407T>A突变对氯吡格雷活化作用强于野生组。然而80G>T、389C>A、831G>A、1414G>T 4个基因突变组的血小板聚集率及VASP水平与野生组无差异(P均>0.05)。3.对患者随访结果显示,有2例携带407T>A突变的患者出现了出血事件,1例携带80G>T和1例携带1414G>A基因突变的患者分别发生了心肌梗死和再发心绞痛事件。结论:1.CYP2C19 80G>T为新发基因突变。2.首次发现CYP2C19 407T>A突变可增强CYP2C19酶对氯吡格雷的活化作用,携带此突变的CHD患者双联抗血小板治疗时,应警惕出血事件的发生,可考虑减少治疗剂量、缩短治疗时间或更换其它不经过CYP2C19蛋白酶代谢的抗血小板药物。