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目的1.研究复方参鹿颗粒(Compound Shenlu Granules,CSG)对肾阳虚型较低危MDS患者外周血象、骨髓CD34~+细胞凋亡率的影响,探讨复方参鹿颗粒抑制p38MAPK磷酸化改善骨髓造血功能的机制。2.对肾阳虚型较低危MDS患者骨髓CD34~+细胞进行体外培养,以研究CSG含药血清对CD34~+细胞凋亡率的影响,探讨抑制p38MAPK磷酸化改善骨髓造血功能的机制,为临床治疗肾阳虚型较低危MDS提供理论依据。方法1.将入组的肾阳虚型较低危MDS患者随机平均分为复方参鹿颗粒(CSG)组和安特尔组,药物干预3个月,观察并分析2组患者治疗前后的外周血细胞计数变化。选取年龄匹配的非MDS引起的血细胞减少患者作为对照组,获取对照组和两组MDS患者治疗前后的骨髓单个核细胞(BMMNC),利用Annexin V/PI双染流式细胞术检测骨髓CD34~+细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测BMMNC中p38、p-p38的蛋白表达,试分析p-p38蛋白表达和CD34~+细胞凋亡率的相关性。2.制备CSG含药血清和空白血清。将体外培养分成以下四组:CSG含药血清组、空白血清组、SB202474组和SB203580组。取得患者知情同意后,获取肾阳虚型较低危MDS患者BMMNC,与10%CSG含药血清或空白血清或p38抑制剂共培养,Annexin V/PI双染流式细胞术检测CD34~+细胞凋亡率,WB检测骨髓细胞p38、p-p38蛋白表达。免疫磁珠分选法分离CD34~+细胞,用甲基纤维素人/造血干祖细胞半固体培养基与10%CSG含药血清或空白血清或p38抑制剂共培养,观察集落形成单位-造血干/祖细胞集落(CFU-HSPC)形成情况,并采用荧光原位杂交技术(FISH)检测集落中异常克隆比例。结果在临床研究中发现,与治疗前比较,CSG组和安特尔组治疗后的外周血细胞计数均有所上升,CSG组红细胞、血红蛋白计数有明显差异(P<0.01),血小板计数差异具有统计学意义(P<0.05),而白细胞计数差异无统计学意义(P>0.05),提示CSG对骨髓红系无效造血改善明显。安特尔组红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白计数虽有上升但差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组非MDS引起的血细胞减少患者相比,肾阳虚型较低危MDS存在骨髓CD34~+的高凋亡和p38MAPK的过度磷酸化,经CSG干预后,骨髓CD34~+细胞凋亡率降低,并且相关性分析提示CD34~+细胞凋亡率降低与p-p38蛋白表达降低呈正相关(P<0.01)。体外细胞培养实验发现,CSG含药血清影响肾阳虚型较低危MDS患者骨髓骨髓CD34~+细胞凋亡,并对其造血干/祖细胞集落的形成产生一定程度的影响。与SB202474组和空白血清相比,CSG含药血清组凋亡率、p-p38蛋白表达均有所下降(P<0.05),但集落形成数增加(P<0.01);结合FISH检测发现,CSG含药血清干预后形成的CFU-HSPC中,来源于MDS异常克隆的比例显著低于对照组(P<0.05)。相关性分析发现,其异常克隆的比例降低与p-p38蛋白表达水平下降呈正相关(P<0.01)。结论本研究初步验证了CSG是改善肾阳虚型较低危MDS骨髓造血功能的有效中药复方,尤其是对红系无效造血影响明显,并进一步明确了温肾益髓中药复方治疗肾阳虚型较低危MDS的作用机理。以上研究结果提示,复方参鹿颗粒能通过抑制p38蛋白的过度磷酸化,降低CD34~+细胞凋亡率,从而部分改善骨髓的造血功能,为“温肾益髓”治则在临床上的应用提供了一定的理论依据,但复方参鹿颗粒对肾阳虚型较低危MDS异常炎症信号调控作用的深层次机制仍需更深入的研究。