目的:本次实验以自发型糖尿病db/db小鼠作为研究模型,并通过观察FGF23/CaMKⅡ信号通路介导的内质网应激,探讨db/db小鼠心肌损伤的可能机制及肾元颗粒的干预作用。方法:将45只db/db雄性小鼠随机分为3组,模型组（Modle Group,MD）、厄贝沙坦组（Ibesartan Group,IBT）、肾元颗粒组（Shen Yuan Ke Li Group,SYKL）,每组15只;15只同窝野生型小鼠则自动成为正常对照组（Normal control Group,NC）。NC组小鼠给予正常小鼠饲料喂养,MD组、SYKL组和IBT组给予高磷饲料（磷1.2%,钙1.6%）。小鼠适应性喂养1周后,对各组小鼠进行12周药物干预。NC组和MD组给予双蒸水灌胃,IBT组予以厄贝沙坦混悬液灌胃(30mg·kg^-1),SYKL组予以肾元颗粒混悬液灌胃(6.0g·kg^-1),各组小鼠给药体积相同(20mL·kg^-1·d^-1)。在此期间,监测各组小鼠精神、饮食、饮水、体重以及尿量等一般状况,检测各组小鼠尿微量白蛋白的含量及血糖水平。12周后,处死小鼠,收集各组小鼠血液和心肾组织。取一部分肾脏和心脏组织采用多聚甲醛固定,余置于-80℃冰箱中冻存。采用全自动生化仪检测各组小鼠血清中钙磷含量、血肌酐、尿素氮;HE染色和Masson染色观察小鼠心脏和肾脏的病理形态情况改变;Tunel染色检测心肌细胞凋亡情况;免疫荧光双标检测各组小鼠肾脏Klotho和FGFR1相互作用的情况;免疫荧光检测各组小鼠心脏FGFR4和PLCγ1蛋白表达情况;免疫组化检测各组小鼠心脏p-CaMKⅡ以及内质网应激标志蛋白GRP78和CHOP表达情况;ELISA检测血清中FGF23含量以及尿液中尿微量白蛋白含量;Real-time PCR检测各组小鼠肾脏中Klotho和心脏中ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、Bcl-2、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1的mRNA表达情况;Western Blot检测各组小鼠肾脏中Klotho和心脏中Bax、Bcl-2、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1、p-CaMKⅡ蛋白表达情况。结果:1.各组小鼠一般状况:NC组小鼠皮毛光亮致密有泽,饮水、进食均正常,体重增加较为平稳,小鼠活跃,精神状态良好。与NC组小鼠比,MD组小鼠随着时间的推移皮毛暗淡无泽,伴有体重增加（P<0.01）、多饮、多食、小便量多,小鼠垫料反复湿透,精神不振,动作迟缓,反应迟钝。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠皮毛稍有光泽,伴有体重增加（P>0.05）、多饮、多食、小便量多,小鼠垫料反复湿透,但精神较MD组小鼠为佳,运动稍迟缓,反应欠灵敏。2.各组小鼠生化指标结果:NC组小鼠生化指标正常,血磷、血钙、Scr、BUN和mALB未见异常波动。与NC组小鼠比,MD组小鼠mALB、血磷和肾功能指标Scr、BUN均出现不同水平的上调（P<0.01）,而小鼠血钙含量具有不同水平的下调（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠mALB、血磷和肾功能指标Scr、BUN具有不同水平的下调（P<0.05）,而小鼠血钙含量具有不同水平的上调（P<0.05）。3.各组小鼠血糖结果:NC组小鼠血糖正常,随着时间的推移并未见血糖异常波动。与NC组小鼠比较,MD组小鼠血糖随着时间的推移而逐渐升高（>16.7mmol/L）,且两组之间的差异具有显著意义（P<0.01）;予以肾元颗粒和厄贝沙坦干预12周后,SYKL组和IBT组小鼠血糖未见下降,且与MD组小鼠差异无统计学意义（P>0.05）。4.各组小鼠肾脏病理染色结果:NC组小鼠肾脏表面光滑,未见隆起和破损,大小正常;HE染色可见NC组小鼠肾单位结构清晰完整,小球系膜细胞及基质未见增生,基底膜无增厚,未见纤维组织增生,未见肾小管水肿;Masson染色提示NC小鼠肾脏未见蓝色胶原纤维沉积。与NC组小鼠比,MD组小鼠肾脏体积出现显著增大,颜色质地偏暗,表面点状隆起,可见少许脓点;HE染色提示MD组小鼠肾小球体积增大,囊腔变窄,系膜细胞增生,基底膜和系膜增厚;Masson染色提示MD组小鼠肾脏可见显著的蓝色胶原纤维沉积（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠肾脏表面较为光滑,未见隆起和破损,肾脏体积稍增大;HE染色SYKL组和IBT组小鼠可见较为清晰的肾单位,小球系膜细胞及基质增生减轻,基底膜稍增厚;Masson染色提示SYKL组和IBT组小鼠肾脏蓝色胶原纤维沉积较轻,胶原沉积百分比低于MD组小鼠（P<0.01）。5.各组小鼠HW/BW指数结果:NC组小鼠HW/BW指数正常,未见显著升高。与NC组小鼠比,MD组小鼠HW/BW指数显著上调（P<0.01）;与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠HW/BW指数显著的下调（P<0.01）。6.各组小鼠心脏病理染色结果:NC组小鼠心脏大小正常,色泽红润,组织表面未见脂肪组织附着;HE染色显示NC组小鼠心肌无肥大表现,心肌细胞及心肌纤维排列整齐,未出现心肌纤维的断裂,无心肌间质成纤维细胞浸润及增殖增加;Masson染色提示NC组小鼠心脏未见蓝色胶原纤维沉积。与NC组小鼠比,MD组小鼠心脏体积肥大,色泽为暗褐色,表面可见脂肪组织附着;HE染色显示MD组小鼠心肌细胞肥大,心肌细胞和肌纤维排列紊乱,以及心肌纤维断裂;Masson染色提示MD组小鼠心肌胶原沉积明显增加（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠心脏体积稍变小,心脏表面附着脂肪组织;HE染色显示SYKL组和IBT组小鼠心肌细胞肥大减轻,心肌细胞和心肌纤维排列稍紊乱,出现少部分的心肌纤维的断裂;Masson染色提示SYKL组和IBT组小鼠心胶原沉积明显减少（P<0.01）。7.各组小鼠血清ELISA检测结果:NC组小鼠血清FGF23含量水平正常,未见异常波动。与NC组小鼠比,MD组小鼠血清FGF23含量显著上调（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠血清FGF23含量出现不同水平的下调（P<0.05,P<0.01）。8.各组小鼠心脏和肾脏Real-time PCR检测结果:NC组小鼠肾脏Klotho mRNA表达正常,未见降低,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1 mRNA表达相对较低,心脏Bcl-2 mRNA表达维持在较高水平。与NC组小鼠比,MD组小鼠肾脏Klotho mRNA表达显著降低（P<0.01）,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1 mRNA表达出现升高（P<0.05,P<0.01）,心脏Bcl-2 mRNA表达出现显著降低（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠肾脏Klotho mRNA表达显著升高（P<0.01）,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1 mRNA表达出现降低（P<0.05,P<0.01）,心脏Bcl-2 mRNA表达出现显著升高（P<0.01）。9.各组小鼠心脏和肾脏Western Blot检测结果:NC组小鼠肾脏Klotho蛋白表达正常,未见降低,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1、p-CaMKⅡ蛋白表达相对较低,心脏Bcl-2蛋白表达维持在较高水平。与NC组小鼠比,MD组小鼠肾脏Klotho蛋白表达显著降低（P<0.01）,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1、p-CaMKⅡ蛋白表达显著升高（P<0.01）,心脏Bcl-2蛋白表达出现显著降低（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠肾脏Klotho蛋白表达显著升高（P<0.01）,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1、p-CaMKⅡ蛋白表达出现降低（P<0.01）,心脏Bcl-2蛋白表达出现显著升高（P<0.01）。10.各组小鼠心脏IHC检测结果:NC组小鼠心肌细胞中GRP78、CHOP和p-CaMKⅡ蛋白表达较其他三组低;与NC组小鼠比,MD组小鼠心脏GRP78、CHOP和p-CaMKⅡ蛋白阳性表达结果占比显著增加（P<0.01）;与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠心脏GRP78、CHOP和p-CaMKⅡ蛋白阳性表达结果占比显著增加（P<0.01）。11.各组小鼠心脏Tunel染色结果:NC组小鼠心肌细胞核未见明显着色。与NC组小鼠比,MD组小鼠心肌细胞核着色增加,提示心肌细胞凋亡显著增加（P<0.01）;与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠心肌细胞凋亡数量明显减少（P<0.01）。12.各组小鼠心脏免疫荧光染色结果:NC组小鼠比,MD组小鼠心脏FGFR4、PLCγ1蛋白荧光强度显著增加（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠心脏FGFR4、PLCγ1蛋白荧光强度明显减少（P<0.01）。13.各组小鼠肾脏免疫荧光双标染色结果:NC组小鼠肾脏Klotho和FGFR1蛋白的表达量及共定位蛋白量多。与NC组小鼠比,MD组小鼠肾脏Klotho和FGFR1共定位蛋白显著减少;与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠肾脏Klotho和FGFR1共定位蛋白显著增加。结论:1.肾元颗粒可改善db/db小鼠钙磷代谢和肾功能,减轻小鼠肾脏病理损伤;2.肾元颗粒可通过抑制内质网应激改善db/db小鼠心肌损伤的发生;3.肾元颗粒可通过上调Klotho蛋白的表达,使得FGF23/CaMKⅡ信号通路得到抑制,减少CaMKⅡ磷酸化,使得其介导的内质网应激信号通路减弱。