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背景与目的肿瘤的生长和转移与肿瘤血管生成(Angiogenesis)密切相关。血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)及其受体在肿瘤血管形成中起着关键的调节作用,能刺激血管内皮细胞分裂、增殖,诱导血管生成,有助于肿瘤的生长和转移。已发现的VEGFR有三种：VEGFR1(FLT-1)、VEGFR2 (FLK-1、KDR)和FLT-4,VEGFR2在VEGF相关的病理性血管形成中发挥了重要作用。阻断KDR表达是一种较好的抗肿瘤治疗策略。因此,本课题采用化学修饰的siRNA在体外敲减KDR基因,探讨KDR的表达抑制对乳癌细胞抑癌基因甲基化状态和凋亡的诱导作用及其机制,为其应用于临床提供理论和实验依据。方法体外化学合成针对KDR基因的siRNA序列,在脂质体Lipofectamine2000TM介导下转染MCF-7细胞,行Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学改变；采用RT-PCR检测caspase-3、survivin、NES1及RUNX3表达水平；甲基化特异性PCR (methylation specific PCR, MSP)技术检测NES1和RUNX3基因的甲基化情况；比色法检测caspase-3的活性；利用免疫组织化学方法检测survivin的表达,并用图象分析仪分析蛋白表达强度。结果靶向KDR的siRNA转染MCF-7后诱导细胞凋亡,caspase-3的表达和活性上调,(P<0.05);NES1及RUNX3基因甲基化逆转,mRNA表达恢复；survivin基因mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论KDRsiRNA在体外能逆转MCF-7细胞的NES1及RUNX3基因甲基化,并诱导细胞凋亡,其分子机制与调节凋亡相关基因caspase-3、survivin、NES1及RUNX3的表达有关。