溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B3（solute carrier organic anion transporter family member 1B3,SLCO1B3）是调控绿壳蛋鸡蛋壳颜色的主效基因,其编码的蛋白为OATP1B3。赤水乌骨鸡产绿壳蛋,肉质好,耐粗饲,是绿壳乌骨鸡典型代表之一。本研究通过直接测序的方法来鉴定赤水乌骨鸡母鸡SLCO1B3基因外显子上的遗传变异位点,并与蛋品质指标进行相关性分析。同时,构建p EGFP-C1-SLCO1B3真核表达载体,培养鉴定赤水乌骨鸡的蛋壳腺上皮原代细胞,开展SLCO1B3基因在鸡蛋壳腺上皮细胞中的表达及亚细胞定位研究;利用免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）结合质谱技术（mass spectrometry,MS）来筛选和鉴定与鸡SLCO1B3蛋白相互作用的细胞蛋白;构建了SLCO1B3基因沉默表达载体,对SLCO1B3基因与FXR1、CTTN、RPL12、RPS17基因之间的调控关系进行了研究,并对FXR1、CTTN、RPL12、RPS17基因在赤水乌骨鸡不同组织中的表达情况进行检测,探究相关基因对蛋壳颜色的影响。本研究丰富了鸡蛋绿壳性状的分子理论研究,主要研究结果如下:1.对300只赤水乌骨鸡的SLCO1B3基因的功能突变位点EAV-HP进行基因分型,筛选出109只绿壳纯合基因型（SL/SL）的母鸡。在这109只纯合子基因型（SL/SL）的赤水乌骨鸡母鸡的SLCO1B3基因的所有外显子上共检测到3个SNPs突变位点,这些位点位于第5外显和第6外显子上,都属于中度多态,三个突变位点之间不存在强连锁不平衡;第5外显子上的g.65235858G＞A位点突变为非同义突变,突变后m RNA二级结构发生改变;单倍型分析结果表明,3个SNP位点共发现5种单倍型和6种双倍型;关联性分析表明这3个SNP位点构建的双倍型对赤水乌骨鸡蛋壳颜色△L*值、蛋壳颜色△b*值、蛋形指数有显著影响（P＜0.05）。综上,表明SLCO1B3基因的遗传变异与蛋壳颜色、蛋形指数存在显著相关。2.本研究构建了pEGFP-C1-SLCO1B3真核表达载体,将其转染到赤水乌骨鸡的蛋壳腺上皮原代细胞中,Western blotting检测表明SLCO1B3基因融合蛋白能在鸡的蛋壳腺上皮细胞中成功表达,亚细胞定位在细胞质与细胞核中。通过免疫共沉淀实验富集鸡SLCO1B3蛋白的互作细胞蛋白,对收集的蛋白进行质谱鉴定。结果表明:通过质谱鉴定到了鸡SLCO1B3基因的37个互作蛋白质;生物信息学分析显示这些蛋白质主要定位于细胞质、细胞核,主要参与细胞过程、生物调节和能量代谢,具有蛋白结合能力、结构分子活性。结合基因的功能分析,筛选出的FXR1、RPS17、CTTN、RPL12蛋白可能与鸡蛋的绿壳性状有较密切关系。3.构建SLCO1B3沉默表达载体,将SLCO1B3过表达载体和沉默载体分别转染到赤水乌骨鸡蛋壳腺上皮细胞中,检测当SLCO1B3基因在过表达或沉默时,FXR1、CTTN、RPL12、RPS17基因在蛋壳腺上皮细胞中的表达情况。结果表明:SLCO1B3过表达能极显著降低蛋壳腺上皮细胞内FXR1基因的表达（P＜0.01）,显著提升RPL12基因的表达（P＜0.05）,极显著提高RPS17基因的表达（P＜0.01）,SLCO1B3过表达对相关基因CTTN的表达无显著影响。当SLCO1B3被沉默后,蛋壳腺上皮细胞内FXR1、CTTN基因的表达量极显著上升（P＜0.01）,RPL12基因的表达量显著下降（P＜0.05）。4.根据鸡蛋的蛋壳颜色,将赤水乌骨鸡分为白壳、浅绿、深绿3种类型,利用qPCR技术分别检测FXR1、CTTN、RPL12、RPS17基因在3种类型赤水乌骨鸡蛋壳腺、肝脏、下丘脑组织中的表达情况。结果表明:FXR1基因在下丘脑中表达量最高（P＜0.05）,白壳型赤水乌骨鸡下丘脑组织中FXR1基因的表达量极显著高于壳蛋颜色为浅绿、深绿的赤水乌骨鸡（P＜0.01）;RPL12基因在肝脏中表达量最高（P＜0.05）,白壳型赤水乌骨鸡肝脏和蛋壳腺中RPL12基因的表达量显著高于浅绿色、深绿色两种类型的赤水乌骨鸡（P＜0.05）;白壳型母鸡肝脏中RPS17基因的表达量显著高于深绿型和浅绿型母鸡（P＜0.05）;CTTN基因在蛋壳腺中表达量最高（P＜0.05）,各类型赤水乌骨鸡组织中CTTN基因的表达量差异不显著（P＞0.05）。5.将蛋壳颜色与FXR1、CTTN、RPL12、RPS17基因的表达量进行关联性分析。结果表明FXR1基因在下丘脑中的表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关（P＜0.01）;RPL12基因在蛋壳腺和肝脏中的表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关（P＜0.01）;RPL12基因在下丘脑中的表达量与蛋壳颜色△a*值显著负相关（P＜0.05）。