滇产药用植物重楼和黄精叶面病斑中真菌的多样性研究

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目的:通过广泛调查滇产药用植物重楼和黄精叶面病斑中真菌分类单元,明确两种药用植物叶面病斑中真菌的多样性及其群落结构,发现并描述叶面病斑中真菌新的分类单元,为发掘致病真菌及阐述其致病机制、保证药用植物有效成分含量、预防天然药物中的真菌毒素危害健康等公共卫生问题提供基础资料和理论依据。方法:本研究从大理白族自治州(大理大学实践基地、挖色镇、永平县)分别采集药用植物重楼和黄精叶片标本512份和576份,通过体式显微镜观察叶面病斑部位并直接挑取分离真菌,结合形态学特征(菌落、分生孢子、分生孢子梗、产孢细胞等)和多基因(ITS、TEF、ACT)分子生物学方法对其叶面病斑中真菌进行物种鉴定。采用香农-威纳指数和群落相似性指数分析重楼和黄精叶面病斑中真菌多样性及其群落相似性。结果:1.从3个种植地采集的512份重楼样品中,观察获得菌株450株,分离纯化真菌培养物229份,共205株真菌获得分子数据,有效序列459条(ITS:190条;ACT:160条;TEF:109条),鉴定出重楼叶面病斑中真菌13属41种,包括Alternaria、Cercospora、Cladosporium、Clonostachys、Colletotrichum、Didymella、Epicoccum、Gibellulopsis、Leptosphaeria、Periconia、Sarocladium、Spicellum、Stagonosporopsis,其中常见属为Alternaria(51.71%)和Cladosporium(31.71%)。2.从挖色镇和永平县种植地采集的576份黄精样品中,观察获得菌株249株,分离纯化真菌培养物112份,共97株真菌获得分子数据,有效序列204条(ITS:85条;ACT:92条;TEF:27条),鉴定出黄精叶面病斑中真菌8属23种,包括Alternaria、Aspergillus、Cercospora、Cladosporium、Neocucurbitaria、Periconia、Sarocladium、Trichothecium,其中常见属为Alternaria(30.93%)和Cladosporium(47.42%)。3.对叶面病斑中真菌与宿主的相关性分析发现,重楼和黄精叶面病斑中真菌多样性香农-威纳指数分别是3.88、3.77,即重楼多样性略高于黄精。4.对叶面病斑中真菌与种植地的相关性分析发现,大理大学实践基地重楼叶面病斑中真菌多样性最高(H′=3.72),大理大学实践基地与挖色镇种植地重楼真菌群落相似性最高(S′=0.45);永平县种植地黄精叶面病斑中真菌多样性高于挖色镇(3.64 vs.2.70)。5.从重楼叶面病斑分离、鉴定出Cladosporium的两个新种C.yunnanensis sp.nov.和C.paris sp.nov.,并对其进行了详细的形态描述。结论:不同药用植物之间的叶面病斑中真菌存在宿主特异性,不同种植地药用植物叶面病斑中真菌多样性及其群落结构不同:重楼叶面病斑中真菌多样性略高于黄精,大理大学实践基地重楼叶面病斑中真菌多样性最高,大理大学实践基地与挖色镇种植地重楼叶面病斑中真菌群落相似性最高;永平县种植地黄精叶面病斑中真菌多样性高于挖色镇。
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