乳腺癌的复发转移是乳腺癌患者死亡的主要原因,主要转移部位是肺、肝、骨和脑等器官,在发生转移之前,远隔器官发生一系列分子和细胞水平的改变,形成肿瘤转移前生态位,为血液循环中的肿瘤细胞提供合适的生长环境,促进肿瘤细胞的定植和生长,形成转移病灶。外泌体是细胞外囊泡的一种亚型,具有重要的生物学功能,外泌体被肿瘤细胞分泌至细胞外后会通过血液运输到远隔器官部位,其中所携带的脂质、蛋白或核酸等会直接或间接地影响受体细胞的表型。本课题的研究基于质谱技术对乳腺癌细胞系培养上清以及乳腺癌患者血浆来源的外泌体进行蛋白质组学的鉴定及分析,并进一步探讨高侵袭性乳腺癌细胞系外泌体在转移中的作用机制。我们主要采用了电喷雾质谱（ESI-MS）技术,基于“自下而上”（bottom-up）的研究策略,将超速离心提取得到的外泌体酶解成肽段,通过质谱采集肽段及碎片离子信息,并将得到的肽段信号与数据库中已知序列进行比对,从而得到蛋白质信息。我们鉴定分析了三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231、雌激素受体阳性乳腺癌细胞系MCF-7、正常乳腺上皮细胞系MCF-10A的外泌体蛋白质组学数据,筛选得到候选蛋白质EphA2,并初步探索研究乳腺癌外泌体中EphA2对血管内皮细胞的作用。血管内皮屏障通透性的增加促进了肿瘤转移的发生,我们的研究结果显示乳腺癌外泌体EphA2蛋白在体外实验中促进了脐静脉内皮细胞系HUVEC的迁移、通透性增高以及血管形成。HUVEC细胞与富含EphA2的外泌体孵育24 h后,Western Blot检测全细胞裂解液中紧密连接相关蛋白ZO-1及occludin下调,RhoA蛋白上调。超速离心法提取6例乳腺癌患者以及6例健康志愿者的血浆外泌体,Western Blot结果显示乳腺癌患者EphA2蛋白含量高于健康对照组。因此,我们认为高侵袭性乳腺癌细胞系通过分泌携带EphA2蛋白的外泌体调控血管内皮细胞的通透性,是调控乳腺癌转移的潜在分子机制。